ATP-STD NMR光学によるタンパク質キナーゼのスクリーニング
Mark A McCoy1, Mary M Senior, Daniel F Wyss
1Schering-Plough Research Institute, 2015 Galloping Hill Road, Kenilworth, New Jersey 07033, USA. mark.mccoy@spcorp.com
Journal of the American Chemical Society
|June 2, 2005
まとめ
この研究では,ATP-STD NMRを導入し,マグネシウムまたはマンガンを用いて,タンパク質キナーゼのATP結合部位を検知する方法である. それは,リガンドの親和性を正確に決定し,薬物発見のための結合部位をマップします.
科学分野:
- バイオケミストリー バイオケミストリー
- 構造生物学 構造生物学とは
- 化学生物学 化学生物学とは
背景:
- タンパク質キナーゼは重要な薬物標的ですが,それらのATP結合部位を特徴づけることは困難です.
- リガンド結合研究のための既存の方法は,しばしば特異性がないか,偽陽性になる傾向があります.
研究 の 目的:
- タンパク質キナーゼのATP結合部位を研究するための新しい核磁気共振 (NMR) スペクトロスコピーの方法の開発と検証.
- 活性部位内の阻害剤結合親和性とマップリガンド相互作用の正確な決定を可能にします.
主な方法:
- ATP-STD NMRをMg2+と共に利用して,ATP-競争性リガンドの解離定数 (Ki) を測定する.
- Mn2+をパラマグネティック・プローブ (MnATP) として使って,非ATP競争性リガンドの近接を推測する.
- 化合物とタンパク質の分解の制御のための内部標準と参照を組み込む.
主要な成果:
- ATP-STD NMRテクニックは,ATP-コンペティティブリガンドのKi値の幅広い範囲を正確に決定しました.
- MnATP探査機は,非ATP競争性リガンドの近接を成功裏に推論した.
- 活性部位特異性は,天然のATPリガンドを使用して達成され,誤った陽性を減少させました.
結論:
- ATP-STD NMRは,タンパク質キナーゼのATP結合部位におけるリガンド相互作用を特徴付けるための多用途かつ特定の方法である.
- このテクニックは,キナーゼを標的とした治療法の発見と最適化を強化します.
- Mg2+とMn2+プローブの使用は,包括的な結合部位分析のための補完的な情報を提供します.
