高濃度化学プロテオミクスのタンデム・オートゴナル・プロテオリシス戦略

科学分野:

• プロテオミクス プロテオミクスは,プロテオミクスの
• 化学生物学 化学生物学とは
• 酵素学 酵素学とは

背景:

• プロテオミクスは,活動ベースのタンパク質プロファイリング (ABPP) のような化学戦略を使用して,機能によってタンパク質を豊かにして,ゲノムを機能的に注釈することを目的としています.
• 既存の分析技術は,化学タンパク質原子実験で得られたデータを制限しています.
• 探査標識されたタンパク質とその改変部位を特徴付けるための先進的な方法が必要である.

研究 の 目的:

• 探査で標識されたタンパク質と改変部位の並列特徴化のための高含量化学プロテオミクス戦略を開発する.
• この戦略を適用して,硫酸エステルABPPの標的を組織タンパク質に探知する.

主な方法:

• タンデム・オートゴーナル・プロテオリシス (TOP) 戦略の開発.
• "クリック・ケミストリー"を用いて,バイオチンとたばこエッチウイルス (TEV) のプロテアゼ分裂部位で,探知器で標識されたタンパク質をタグ付けする.
• ストリープタヴィジンビーズと2段階のタンパク質分解 (トリプシンとTEV) を使用したタンパク質とラベル付けペプチドの配列的濃縮と識別.

主要な成果:

• 組織プロテオームにおける硫酸エステルABPPプローブの標的を特徴付けるTOPメソッドの成功応用.
• 活性部位で標識された多数の酵素の発見.
• 調節部位に変異した酵素と機能不明のタンパク質の識別.

結論:

• TOP戦略は,高含量化学プロテオミクスを可能にし,探査ターゲットの並列特徴と改変サイトを可能にする.
• 硫酸エステル探査機は,活性部位と調節部位を含む多様な機能残留物を標的とする.
• TOPベースの化学プロテオミクスは,タンパク質とその調節残基の特徴づけに価値があります.