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Labeling DNA Probes03:31

Labeling DNA Probes

DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...
Tagging and Fusion Proteins01:24

Tagging and Fusion Proteins

Proteins are involved in several cellular processes and biochemical reactions. Analyzing a specific protein of interest requires it to be isolated from the other proteins in the cell. This is achieved by overexpressing the specific gene in a suitable host to produce large quantities of the target protein. A tag or label is recombined with the gene to produce a fusion protein containing the target protein and the tag. The tags on these fusion proteins can then be used for easy detection and...

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クロマトグラフィーなしでタンパク質の浄化のための自己切除可能な刺激反応タグ.

Xin Ge1, Daniel S C Yang, Kimberly Trabbic-Carlson

  • 1Department of Chemical Engineering, McMaster University, 1280 Main Street West JHE-377, Hamilton, Ontario L8S 4L7, Canada.

Journal of the American Chemical Society
|August 11, 2005
PubMed
まとめ

この研究は,三重融合システムを使用した単純なタンパク質浄化方法を提示しています. このテクニックは,親近性染色体やプロテアゼなしで,E. coli溶解酸から標的タンパク質を素早く分離します.

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科学分野:

  • バイオケミストリー バイオケミストリー
  • 分子生物学は分子生物学である.
  • プロテイン浄化 タンパク質浄化

背景:

  • 伝統的な再結合タンパク質浄化は,しばしば親近性染色体とプロテアゼに依存しています.
  • これらの方法は時間がかかり,費用がかかり,標的タンパク質に損傷を与える可能性があります.

研究 の 目的:

  • 再結合タンパク質の浄化のためのシンプルで迅速でプロテアゼのない方法を開発する.
  • タンパク質の効率的な分離のために,インテインとエラスティン型のポリペプチド (ELP) を含む三重融合システムを利用する.

主な方法:

  • 標的タンパク質,インテイン,ELPを含む融合タンパク質構造は,E. coliで発現した.
  • 浄化には,ELPタグのNaCl誘発の集積が含まれており,その後に微濾過が行われました.
  • 標的タンパク質の割れ分と分離は,インテイン活性と,その後のELP相移行によって達成されました.

主要な成果:

  • 三重融合システムは,標的タンパク質をE. coli lysateから直接迅速に分離することを可能にしました.
  • この方法は,親近性染色学や外因タンパク質酵素を必要とせずに,タンパク質を成功裏に浄化しました.
  • ELPタグの可逆相変遷は,核融合タンパク質の選択的集積と安定化を容易にした.

結論:

  • この新しい浄化戦略は,再結合タンパク質の分離のための簡素化され,効率的な代替案を提供します.
  • intein-ELP融合システムは,タンパク質浄化のための汎用性のあるプラットフォームを提供し,処理ステップと潜在的なタンパク質損傷を最小限に抑えます.