人間とマウスの遺伝子のためのレンチウイルスRNAiライブラリが,配列されたウイルス高濃度スクリーンに適用されます

科学分野:

• * 機能的ゲノミクスと分子生物学.
• *哺乳類の細胞生物学と遺伝学.

背景:

• * ゲノム全体の機能喪失スクリーンのための包括的なレンチウイルス短期ヘアピンRNA (shRNA) ライブラリの開発.
• * 哺乳類の様々な細胞タイプに適用できる多用途のツールの必要性,その中には原始細胞と非分裂細胞が含まれます.

研究 の 目的:

• * 配列およびプールされた機能喪失スクリーニングのための大規模なshRNAライブラリを作成し,検証する.
• *ミトス進行などの重要な細胞プロセスに関与する新種の遺伝子を特定する.

主な方法:

• *ヒトとネズミのゲノム (10万4000のベクトル,2万2000の遺伝子) をターゲットにしたレンチウイルス型シャールRNAライブラリを構築.
• * ミトシス進行調節器のための高濃度画像ベースのスクリーンの開発.
• * 図書館のサブセット (5000のベクトル,1,028の遺伝子を標的に) を使って,ヒトの癌細胞にスクリーンを適用する.

主要な成果:

• * ミトスの進行と増殖を調節するいくつかの既知の遺伝子と約100の新規候補遺伝子の特定.
• * 遺伝子ごとに複数のshRNAsを使用することによって,ヒットの効率的な機能的検証の実証.
• *生物学的発見のための配列画面でshRNAライブラリを成功裏に適用しました.

結論:

• * 開発されたレンチウイルスのshRNAライブラリは,機能的ゲノミクス研究のための価値ある,広く適用可能なリソースです.
• * この研究は,これらのライブラリを高通量機能喪失画面で使用するための実用的な枠組みと検証を提供します.
• * このリソースは,多様な生物学的文脈における細胞プロセスに関与する遺伝子の発見を容易にする.