細胞ベースのK+センサーを用いたK+チャネルとトランスポーターのための細胞ベースの光スクリーン

科学分野:

• バイオケミストリー バイオケミストリー
• 細胞生物学 細胞生物学
• 薬理学 薬理学とは

背景:

• カリウム (K+) チャンネルとトランスポーターは,重要な薬物標的である.
• 以前,トリアザクリプトン (TAC) ベースのK+センサー (TAC-Red) を開発し,in vivoイメージングを行っていました.
• 細胞膜を横断するK+輸送を定量化するための改善された方法が必要である.

研究 の 目的:

• 新しい緑色光細胞外K+センサー,TAC-Limedex.を合成し,検証する.
• 細胞ベースの測定でK+流出と輸送を測定するためのTAC-Limedexの有用性を実証する.
• 高通量スクリーニングのための測定法を適応させるため.

主な方法:

• TAC-bodipyのデクストラン結合体であるTAC-Limedexの合成.
• 異なるK+濃度,Na+,Cl-およびpHに対するTAC-Limedex光反応の特徴.
• TAC-Limedexを使用してHT-29およびSiHa細胞からのK+流出量を定量化する.
• K+チャネルとトランスポーターの薬理学的操作.

主要な成果:

• TAC-Limedexは0−2 mM K+で光度が50%増加し,他のイオンやpHに対して無感性であった.
• HT-29細胞のK+流出は,ATP誘発のK+チャネル活性化によって8倍に増加し,ブロック剤によって抑制された.
• SiHa細胞における電子中性K+/Cl-コートランスポートは,阻害剤によって完全に抑制され,低圧状態でK+流出が3倍に増加することを示した.
• 自動スクリーニングのための光板読み取り器に適応した測定.

結論:

• TAC-Limedexは,細胞膜輸送研究のための,敏感で特異的な細胞外K+センサーです.
• 光ベースの測定は,K+流出とトランスポーター活動を効果的に定量化します.
• この方法は,K + 輸送調節器を特定するための放射性測定に対する高通量代替手段を提供します.