アルファアミノ酸のエナチオセレクティブインジケーターシスプレスメントアッセイを,高通量スクリーニングに適したプロトコルに移行する

科学分野:

• アナリティカル・ケミストリー (Analytical Chemistry) とは
• 有機化学 オーガニック・ケミストリー
• バイオケミストリー バイオケミストリー

背景:

• ハイ・スループット・スクリーニング (HTS) は,非対称反応の分析に不可欠です.
• エナティオメール過量 (ee) の正確な決定は,キラル化合物分析に不可欠です.
• EEの決定のための既存の方法は,時間がかかることがあります.

研究 の 目的:

• アミノ酸エナチオメリック過剰の高通量スクリーニングのためのエナチオセレクティブインジケーターシフトアッセイ (eIDA) の有効性を実証する.
• eIDAの正確性と速度を従来の方法と比較する.
• 人工ニューラルネットワーク (ANN) とeIDAとの組み合わせでの利用を評価する.

主な方法:

• 96wellプレート形式のクロムアズロールSインジケーターを搭載したキラル受容体 [Cu(II) ((1))) ((2+) と [Cu(II) ((2))) ((2+) ]を使用したeIDAの開発と実装.
• 開発されたeIDAを使用したエナティオメア過剰校正曲線の生成.
• eIDA,校正曲線,ANNを用いた未知EEの合成バラインサンプル分析.
• eIDAの結果を,キラル高性能液体染色学 (HPLC) とプロトン核磁気共鳴 (1H NMR) のキラルシフト反応剤分析と比較.

主要な成果:

• eIDAは,UV-VISスペクトルフォトメトリーと同等の精度を示したが,速度が著しく増加した.
• eIDAの校正曲線を用いて合成されたバリンサンプルを分析した結果,キラルHPLCと比較して4.7%の誤差が生じた.
• (1) H NMRキラルシフト反応剤分析と比較して,バリンサンプルのANN分析は2.2%の誤差を示した.
• 96wellプレートeIDAメソッドは1分以内に96 ee値を決定できます.

結論:

• eIDAは,アルファ-アミノ酸のエナティオメリック過剰の高通量スクリーニングのための実行可能で効率的な技術です.
• 開発されたeIDAメソッドは,従来のeE決定技術に対して,迅速かつ正確な代替手段を提供します.
• ANNとの統合により,複雑な反応サンプルを分析するためのeIDAの正確性と適用性がさらに向上します.