フォスフォパントエニルトランスファーゼによって触媒化された直接部位選択的共性タンパク質不動化
Lu Shin Wong1, Jenny Thirlway, Jason Micklefield
1School of Chemistry and Manchester Interdisciplinary Biocentre, The University of Manchester, 131 Princess Street, Manchester M1 7DN, United Kingdom.
Journal of the American Chemical Society
|August 30, 2008
まとめ
研究者は,Sfp酵素とybbRタグを使用して,表面にタンパク質を固定するための新しい方法を開発しました. この技術は,安定した,サイト固有の共性結合を可能にし,バイオセンサやマイクロアレイなどのアプリケーションのタンパク質機能を保存します.
科学分野:
- バイオケミストリー バイオケミストリー
- マテリアルサイエンス 材料科学
- 化学工学は化学工学というものです.
背景:
- タンパク質の不動化は,タンパク質マイクロアレイ,バイオセンサ,バイオカタリシスなどのアプリケーションに不可欠です.
- 安定した,機能的,均質な固定タンパク質を開発するには,効率的でサイト固有の共性固定化方法が必要です.
研究 の 目的:
- フォスフォパンテイニルトランスファーゼ (Sfp) を使って,再結合タンパク質の固体基板への直接的,サイト固有の共性不動化を触媒化する.
- 異なるタンパク質と表面におけるこの方法の汎用性を実証する.
主な方法:
- Sfp酵素を利用して,ybbRタグの再結合タンパク質がCoA機能化された表面に結合することを触媒化しました.
- 質量スペクトロメトリを用いて,タンパク質と支柱の間の共性結合形成を確認した.
- PEGA樹脂ビーズとヒドロゲルマイクロアレイスライドで試された不動化.
主要な成果:
- Sfpは,モデルアシルキャリアタンパク質 (ACP) のサイト固有の共性不動化を,CoA誘導のPEGA樹脂ビーズに成功裏に触媒化しました.
- ルシフェラーゼ (Luc) とグルタチオン-S-トランスフェラーゼ (GST) ybbR融合タンパク質は,高い酵素活性で固定されました.
- この方法は,ビーズとヒドロゲルスライドの両方で,様々なybbR融合タンパク質 (ACP,Luc,GST,チオレドキシン) に対して有効であることが証明されました.
- 細胞リサート混合物から直接成功して固定することが示されました.
結論:
- Sfp触媒による表面結合は,タンパク質の不動化のための軽度,定量,および迅速な方法です.
- この単一のステッププロセスは,標的タンパク質の事前の化学的改変を必要としません.
- この戦略は,多様なアプリケーションのための機能的なタンパク質ベースの材料を作成するための汎用性のあるプラットフォームを提供します.
