Uncoating protein (hsc70) は,クラトリンの軽鎖LCaの構成的に不安定なドメインと結合し,ATPの水解を刺激する

科学分野:

• 細胞生物学 細胞生物学
• 分子生物学は分子生物学である.
• タンパク質生化学 タンパク質生化学

背景:

• クラトリンコーティングベジクル (CCV) の脱コーティングは,細胞密輸に不可欠です.
• 熱ショック関連タンパク質70 (hsc70) は,CCV脱コーティングの重要な媒介である.
• クラトリンの光鎖 (LCaとLCb) は,この過程でhsc70と相互作用することが知られている.

研究 の 目的:

• hsc70媒介のCCV無コーティングにおけるクラスリン軽鎖同型 (LCaとLCb) の異なる役割について調査する.
• クラスリン光鎖とhsc70.scとの相互作用の基礎となる分子機構を解明する.
• 光鎖の配列変化がhsc70との相互作用と脱塗プロセスにどのように影響するかを決定する.

主な方法:

• クラトリンの光鎖の浄化とペプチドの合成.
• hsc70 ATP 酵素活性刺激を測定するためのアッセイ.
• hsc70媒介クラスリン無コーティングの阻害測定.
• 異なるイオンおよびカルシウム濃度下での軽鎖ペプチドの構成変化の分析.

主要な成果:

• LCa と LCb は hsc70 と結合し,ATP の水解を刺激しますが,LCa ははるかに有効です.
• LCaは,LCbと比較してhsc70媒介のクラスリン脱コーティングのより大きな阻害を示しています.
• LCaとLCbのプロリンとグリシンに富んだ領域 (残留47-71) の配列の相違は,それらの異なる結合および機能的活動と相関しています.
• LCaは,LCbとは異なり,イオン強度とカルシウムイオン濃度の影響を受け,この領域で可逆的な形状の変化を示します.

結論:

• LCaは,クラスリンでコーティングされた膀の脱コーティング中にhsc70との相互作用において,LCbよりも重要な役割を果たします.
• LCaの形状の柔軟性,特にそのhsc70結合部位は,重要な規制要因です.
• LCaコンフォームがコーティングされた膀の脱コーティングの効率を動的に調節するモデルが提案されています.