スプリット・ルシフェラーゼ3ハイブリッド系を有効にしたコイル・コイル: タンパク質キナーゼのプロファイリング阻害剤に対して適用される
Benjamin W Jester1, Kurt J Cox, Alicia Gaj
1Department of Chemistry and Biochemistry, University of Arizona, 1306 East University Boulevard, Tucson, Arizona 85721, USA.
Journal of the American Chemical Society
|July 31, 2010
まとめ
研究者らは,特定のタンパク質キナーゼ阻害剤を迅速に特定するために,3つのハイブリッドシステムを用いた新しい分裂タンパク質アッセイを開発しました. この方法は,薬物の発見とキナーゼシグナル伝達経路の理解に役立ちます.
科学分野:
- バイオケミストリー バイオケミストリー
- 分子生物学は分子生物学である.
- ドラッグ・ディスカバリー・ディスカバリー・ドラッグ・ディスカバリー・ドラッグ・ディスカバリー
背景:
- タンパク質キナーゼは,細胞過程の重要な調節体であり,その調節不全は様々な病気に関連しています.
- 選択性タンパク質キナーゼ阻害剤の開発は,治療の進歩に不可欠です.
- キナーゼ阻害剤を特定するための伝統的な方法は,しばしば労苦的で,精製されたタンパク質を必要とします.
研究 の 目的:
- 特定のタンパク質キナーゼ阻害剤を特定するためのシンプルで迅速で実用的な方法を開発する.
- インヒビタースクリーニングのためのコイル・コイル・アシストトライハイブリッドシステムを用いて,スプリット・プロテインの方法論を確立する.
- この新しいスクリーニングアプローチの一般的な適用性と有用性を実証するために.
主な方法:
- スプリット・ファイヤーフライ・ルシフェラーゼ系は,コイルド・コイルドメイン (FosとJun) で設計された.
- 興味のあるタンパク質キナーゼがN端の断片と溶融され,コイルコイルFos.
- パンキナーゼ阻害剤と結合したジュンが加えられ,複合体を形成し,ルシフェラーゼ活性を再構成した.
主要な成果:
- 3つのハイブリッド系は,複合体の形成時に分裂ルシフェラーゼの活性を再構成することに成功しました.
- 阻害剤のスクリーニングは,80の既知の阻害剤に対して6つのタンパク質キナーゼをテストすることによって実証されました.
- この方法は,構造/機能分析とアロステル抑制剤の特定の可能性を示した.
結論:
- 開発されたコイル・コイル・アシストド・トライハイブリッドシステムは,特定のタンパク質キナーゼ阻害剤を特定するための迅速かつ実用的なアプローチを提供します.
- この方法は,精製されたキナーゼの必要性を回避し,阻害剤のスクリーニングを簡素化します.
- このシステムは,薬剤発見とキナーゼ生物学の理解において,幅広い潜在的な応用がある.
