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レトロウイルスプロテアゼを共振エネルギー転送で測定するための新しいフッ素基板

E D Matayoshi¹, G T Wang, G A Krafft

¹Pharmaceutical Discovery Division, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL 60064.

Science (New York, N.Y.)

|February 23, 1990

まとめ

ヒト免疫不全ウイルス1プロテアゼ (HIV-1PR) の活性を測定するために,新しい光共振エネルギー伝達 (RET) アッセイが開発されました. この検査は,ウイルスのポリタンパク質の処理を監視することによって,新しいエイズ治療薬の迅速な識別を可能にします.

科学分野:

バイオケミストリーバイオケミストリー
分子生物学は分子生物学である.
ドラッグ・ディスカバリー・ドリッグ・ディスカバリー・ドリッグ・ディスカバリー・ドリッグ・ディスカバリー

背景:

ヒト免疫不全ウイルス1 (HIV-1) の11kDプロテアゼ (PR) は,ウイルスの成熟に不可欠であり,既得免疫不全症候群 (AIDS) の治療法の主要標的である.
HPLCや電泳法などのHIV-1PRの活性性を研究するための既存の方法は,時間がかかり,運動分析の精度が低い.

研究の目的:

分子内光共振エネルギー伝送 (RET) を使用したHIV-1PR活性に対する新しい継続的な測定を開発する.
新しいHIV-1PR阻害剤の発見を促進し,詳細な酵素学的研究を可能にします.

主な方法:

自然なHIV-1 PR処理部位から得られた光基板 (DABCYL-Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln-EDANS) を合成した.
このアッセイは,HIV-1 PR.による基質の特定の割れから生じる光強度の時間依存の増加を測定します.
同様の基板は,関連する鳥類骨髄芽細胞症ウイルス (AMV) プロテアゼのために設計されました.

主要な成果:

RETアッセイでは,HIV-1PRによってTyr-Pro結合の基質の特定の割れが示され,光度が線形的に増加しました.
このアッセイは,HIV-1 PR.のために割れた基質のモルあたりの光量子産出の40.0倍の増加を示した.
AMV PR基板では,光量子産出量の34.4倍の増加が観察されました.

結論:

開発されたRETベースのアッセイは,レトロウイルスプロテアゼの反応速度を決定するためのシンプルで迅速で正確なものです.
この方法は,HIV-1 PR活性決定のための従来のHPLCと電泳測定法に比べ,有意な利点があります.
このアッセイは,運動分析,阻害剤スクリーニング,ウイルスプロテアゼの詳細な酵素学に有用である.

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