分割されたアプタメルの破裂力による単一の小分子結合の測定 | JoVE Visualize

科学分野:

バイオケミストリーバイオケミストリー
分子生物学は分子生物学である.
ナノテクノロジーナノテクノロジー

背景:

アプタマーとは,特定の標的分子と結合する核酸またはペプチド分子である.
スプリットアプタマーは,結合ポケットを形成することによって,分子認識のためのユニークなアプローチを提供します.
原子力スペクトロスコピー (AFS) は,分子相互作用を研究するために使用される高解像度イメージング技術です.

研究の目的:

アデノシンモノフォスファート (AMP) を結合するように設計された割れたアプタマーの破裂力を測定するために.
生物物理的方法を使用して,分割されたアプタマーに結合するAMPの特異性を調査する.
AMPのラベルフリー検出と単分子分析のためのスプリットアプタマー概念の有用性を実証する.

主な方法:

原子力スペクトロスコーピー (AFS) を利用して,分裂したアプタメルの破裂力を測定しました.
アデノシンモノフォスファート (AMP) を導入し,アプタマー-リガンド相互作用力の変化を観察しました.
結合特異性を確認するためのコントロールとして変異性アプタマーとイノシンを使用した.

主要な成果:

AMPとの結合時にアプタマー破裂力の有意な変化が観察されました.
変異したアプタマーとイノシンは同様の効果を誘導しないため,これらの変化がAMPに特異的であることが実証されました.
観察された破裂力の変化は,特定のAMP-アプタマー相互作用の直接的な結果であることを確認しました.

結論:

分裂アプタマー系はAMPに特異的に結合し,破裂力の変化によって証明されています.
このスプリット・アプタマーアプローチにより,AMPのラベルなしの検出が可能になります.
この方法は,単一分子レベルでAMP結合の解離定数を決定することを可能にします.