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Labeling DNA Probes03:31

Labeling DNA Probes

DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...

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バイオオートゴーナル四旋風連結である.

Ellen M Sletten1, Carolyn R Bertozzi

  • 1Department of Chemistry and Howard Hughes Medical Institute, University of California, Berkeley, California 94720, United States.

Journal of the American Chemical Society
|October 4, 2011
PubMed
まとめ

新しいバイオオートホーゴナル反応である四サイクル連結は,高度な生物学的研究のために開発されています. この方法により,複雑なシステムにおける選択的バイオ分子改変が可能になり,既存のバイオオートホーゴナルツールを補完します.

科学分野:

  • バイオオートゴーナル化学
  • 化学生物学 化学生物学とは
  • バイオ分子工学とは

背景:

  • バイオオルトホーガン化学は,生物系におけるバイオ分子の研究に不可欠である.
  • 既存の方法には,範囲と正交性の限界があります.
  • マルチプレックス生物学的分析のためのツールキットを拡張するために,新しい反応が必要です.

研究 の 目的:

  • 新しいバイオオートホーゴナル反応:四旋風連結を紹介し,特徴づけること.
  • 反応の効率,運動,および生物学的環境との互換性を評価する.
  • 確立されたバイオオートゴーナル化学と正交性を証明するために.

主な方法:

  • クアトリサイクランとNi bis (ディチオリン) 反応剤の間のクアトリサイクラン結合反応の発展.
  • 動力分析により,二次速度定数 (second-order rate constant) を決定する.
  • 細胞溶解物中の改変タンパク質の選択的ラベル付けの実証.
  • オートゴーナリティテストは,ストレインプロモートされたアジド-アルキンサイクロアディションとオキシム結合によるものです.

主要な成果:

  • クアトリサイクラン結合は,0.25M(-1) s(-1の二次速度定数を示しており,これは高速なバイオオートホーゴナル反応に匹敵する.

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  • 反応は水性環境では効果的に機能する.
  • 細胞リサートが存在する場合でも,クアドリサイクランで改変された牛の血清アルブミンの選択的ラベリングが達成されました.
  • 四旋翼連結は,1つの鍋の実験で,ストレスを促進したアジド-アルキンサイクロアディションとオキシム連結との正交性を実証しました.

    • 結論:

    • クアトリサイクラン結合は,新しい,効率的な,そして生物対角の反応です.
    • それは,生物分子の選択的共性改変のための利用可能なツールを拡張します.
    • この反応により,複雑な生物系における複合分析が容易になります.