活体細胞内の特定のタンパク質を標的にするフッ化素のためのダイエルス-アルダーサイクル添加
Daniel S Liu1, Anupong Tangpeerachaikul, Ramajeyam Selvaraj
1Department of Chemistry, Massachusetts Institute of Technology, 77 Massachusetts Avenue, Cambridge, Massachusetts 02139, USA.
Journal of the American Chemical Society
|December 20, 2011
まとめ
私たちは,反電子需要ダイエルス・アルダー化学を用いた,迅速かつ生物互換性の高いタンパク質ラベリング方法を開発しました. この技術により,生細胞の内側と表面の両方で,場所固有の光によるタンパク質のラベル付けが可能になります.
科学分野:
- バイオケミストリー バイオケミストリー
- 化学生物学 化学生物学とは
- 分子イメージングは分子イメージングです.
背景:
- 逆電子需要ダイエルス-アルダー (IEDDA) サイクロアディションは,迅速かつ生物互換性の高いバイオオートホーゴナル反応である.
- サイト固有のタンパク質のラベル付けは,生物のシステムにおけるタンパク質の機能を研究する上で極めて重要です.
研究 の 目的:
- IEDDA化学を用いたサイト固有のタンパク質ラベリングのための2段階のプロトコルを開発する.
- 細胞表面および生きた哺乳類の細胞内のタンパク質の光ラベル付けを可能にします.
主な方法:
- エシェリキア・コライのリポ酸リガゼを用いて,トランス・サイクロオクテンの誘導体のサイト固有の結合をタンパク質にします.
- 光ラベリングのために,テトラジン-フッ化素結合体による後の化学選択派生を採用した.
主要な成果:
- 細胞表面のタンパク質の光性および高感度ラベリングを達成しました.
- 生体細胞内の緑色および赤色の光体による細胞骨格タンパク質の特定のラベル付けを実証した.
- リポ酸リガゼで利用可能なフッ素ホルモンの範囲を広げました.
結論:
- IEDDAのサイクロアディションは,生物学的システムにおけるサイト固有のタンパク質ラベリングのための効率的で汎用的なツールを提供します.
- この方法は,両方の細胞区画のタンパク質の多色イメージングを可能にします.
- 開発されたプロトコルは,タンパク質の生物結合のためのリポ酸リガゼの適用範囲を拡大します.
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