バキュロウイルスタンパク質発現システムを使用して,生きている昆虫の細胞内のタンパク質の高解像度ヘテロ核多次元NMR
Jumpei Hamatsu1, Daniel O'Donovan, Takashi Tanaka
1Department of Chemistry, Graduate School of Science and Engineering, Tokyo Metropolitan University, 1-1 Minami-Osawa, Hachioji-shi, Tokyo 192-0373, Japan.
Journal of the American Chemical Society
|January 19, 2013
まとめ
この研究は,詳細なタンパク質分析のために sf9 細胞を用いた細胞内核磁気共振 (NMR) の新しいアプローチを導入しています. この方法は,高解像度のスペクトルと,生きている細胞内のタンパク質構造の研究を可能にします.
科学分野:
- バイオフィジックス 生物物理学
- 分子生物学は分子生物学である.
- バイオケミストリー バイオケミストリー
背景:
- 細胞内核磁気共鳴 (NMR) は,生きた真核細胞内のタンパク質の研究を可能にします.
- 既存のプロトコルには,適用範囲と適用上の制限があります.
- sf9細胞/バキュロウイルスシステムは,細胞内新型NMR研究のための潜在的なプラットフォームを提供します.
研究 の 目的:
- sf9細胞/バキュロウイルスシステムを用いた新しい細胞内NMRアプローチを導入する.
- 細胞内NMRの能力と応用を拡大する.
- sf9細胞で発現するタンパク質から高解像度のNMRスペクトルを得ることの実現可能性を実証する.
主な方法:
- sf9昆虫細胞におけるモデルタンパク質の発現.
- 2D (1H-15N) 相関と3Dトリプル共振NMRスペクトルの取得.
- 非線形サンプリングと定量的最大エントロピーアルゴリズムをデータ処理に適用する.
- NMR共鳴の初期割り当てとNOEクロスピークの識別.
主要な成果:
- 4つのモデルタンパク質の高解像度2D (1H-15N) 相関スペクトルが得られた.
- Streptococcus protein G B1ドメインの3Dトリプル共振NMRスペクトルは,sf9細胞で得られた.
- 予想される背骨のNMR共鳴の約80%が割り当てられました.
- 3D (15N) で分離されたNOESYスペクトルで,よく解像度のあるNOEクロスピークが特定されました.
結論:
- 開発されたsf9細胞/バキュロウイルスシステムは,細胞内NMR研究に有効です.
- 高解像度のタンパク質スペクトルと構造情報は,sf9細胞内のタンパク質から得ることができます.
- この新しいアプローチは,細胞内のタンパク質構造とダイナミクスを研究するための細胞内NMRの有用性を大幅に拡大します.
