バイオカタリシスのためのバイオアナリシス:アミノトランスフェラーゼ基板発見と特異性プロファイリングのための複合毛細血管電泳-質量スペクトロメトリ測定法
Gleb G Mironov1, Antony D St-Jacques, Alexander Mungham
1Department of Chemistry and ‡Centre for Catalysis Research and Innovation, University of Ottawa , Ottawa, Ontario, Canada , K1N 6N5.
Journal of the American Chemical Society
|August 23, 2013
まとめ
私たちは,毛細血管電泳と質量スペクトロメトリを用いた自動酵素測定法MINISEP-MSを開発しました. この方法は,最小限の反応剤を使用して,酵素基板の特異性と運動を迅速にプロファイルし,新しい生物触媒を発見するのに役立ちます.
科学分野:
- バイオケミストリー バイオケミストリー
- アナリティカル・ケミストリー (Analytical Chemistry) とは
- 酵素学 酵素学とは
背景:
- 酵素の特徴づけは,バイオカタリシスにとって極めて重要です.
- 酵素発見には,高通量メソッドが必要である.
- 既存の測定は,時間がかかり,反応剤が多量化される可能性があります.
研究 の 目的:
- 自動化された酵素測定法MINISEP-MSを導入する.
- 酵素基板特異性をプロファイリングする際の有用性を実証するために.
- 酵素工学と発見のための酵素運動を測定する.
主な方法:
- 開発したMINISEP-MS: 毛細血管電泳と電噴射イオン化質量スペクトロメトリを組み合わせた.
- カピラーをマイクロリアクターとして利用し,同時多基板試験を行う.
- 測定は3つのアミノトランスフェラーゼに適用し,33のアミノ酸基板を試験した.
主要な成果:
- 試験されたアミノトランスフェラーゼの既知の基板特異性を成功裏に再現しました.
- これらの酵素のための新しいアミノ酸基板を発見した.
- アミノ酸ドナー基板の表面的なK (M) とk (cat) の運動パラメータを測定した.
結論:
- MINISEP-MSは,迅速な酵素プロファイリングのための汎用的で自動化されたツールです.
- この測定は,酵素基板特異性の効率的な発見を可能にします.
- MINISEP-MSは,バイオカタリシスのための酵素の識別と工学を容易にする.
