輝度強化DNAFIT-プローブで,組織内の洗浄フリーRNAイメージングを行う
Felix Hövelmann1, Imre Gaspar, Anne Ephrussi
1Institut für Chemie der Humboldt-Universität zu Berlin , 12489 Berlin, Germany.
Journal of the American Chemical Society
|December 4, 2013
まとめ
研究者らは,RNAイメージングのための明るく反応性のあるハイブリッド化プローブを開発した. これらの新しい探査機は,強制インターケレーション (FIT) 探査機と呼ばれ,複雑な手順なしで組織内のRNAの直接光顕微鏡を可能にします.
科学分野:
- 分子生物学は分子生物学である.
- バイオフィジックス 生物物理学
- 顕微鏡による顕微鏡検査
背景:
- 原性オリゴヌクレオチドは,細胞および組織RNAイメージングに不可欠です.
- 高い光反応性と明るさは,バックグラウンドの自光に対してRNAを検出するために不可欠です,特に探査機の洗浄が実現できない場合です.
- 現存する光抑制型探査機は応答性を向上させるが,しばしば十分な明るさがない.
研究 の 目的:
- RNAイメージングのための信号の明るさを増強した高光反応を組み合わせた新しいハイブリダイゼーションプローブを開発する.
- 以前に開発されたマルチ染料プローブにおける自己消火の限界を克服するために.
- 組織のような複雑な生物学的サンプルにおける直接的で効率的なRNAイメージングを可能にします.
主な方法:
- チアゾール・オレンジ (TO) 染料を核塩基代用剤として利用したクエンチャーフリーDNA強制インターケレーション (FIT) 探査機の開発.
- 発光性オキサゾロピリジンアナログJOと反応性TOヌクレオシドを組み合わせて,明るさを高める.
- 光反応率 (F/F0) とモラー絶滅係数を含む,探査機の性能の特徴.
主要な成果:
- 単一鎖のTO/JO FIT探査機は,最小限の光を示し,標的RNAへのハイブリッド化により,滅が防止され,明るい放射が生じます.
- TOヌクレオシドは,光集光器として作用し,消滅係数を高め,JOエミッターにエネルギーを転送し,その結果,43mLmol−1cm−1の明るさになります.
- TO/JO FIT探査機を用いて,複雑な組織におけるオスカルのmRNAの直接光顕微鏡画像化が成功しました.
結論:
- TO/JO FIT探査機は,高い応答性と例外的な明るさの両方を提供することにより,RNA画像の重要な進歩を提供します.
- この方法は,広範な洗浄ステップや特殊な増幅技術を必要とせずに,組織内の迅速で直接的なRNAイメージングを可能にします.
- 開発された探査機は,高度なRNA可視化を促進し,標準的な顕微鏡装置で精巧なイメージングを可能にします.
