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インシットゥ・トランスクリプション:固定された組織部分における補完的なDNAの特定の合成

L H Tecott¹, J D Barchas, J H Eberwine

¹Nancy Pritzker Laboratory of Behavioral Neurochemistry, Department of Psychiatry and Behavioral Sciences, Stanford University School of Medicine, CA 94305.

Science (New York, N.Y.)

|June 17, 1988

まとめ

この研究は,固定組織内のメッセンジャーRNA (mRNA) の局所化のための方法であるin situトランスクリプションを導入します. 研究者らはラットの下垂体でプロオピオメラノコルチンのmRNAをマッピングし,遺伝子調節の研究の可能性を示しました.

科学分野:

分子生物学は分子生物学である.
神経科学は神経科学である.
遺伝学遺伝学とは

背景:

組織内の特定のmRNAトランスクリプトの正確な解剖学的局所化は,遺伝子発現と調節を理解するために重要である.
既存の方法は,速度,感度,または組織構造内で直接mRNA調節を研究する能力に制限がある可能性があります.

研究の目的:

固定された組織部内のmRNAの直接検出と局所化のための新しい技術,in situトランスクリプションを記述し,検証する.
薬理学的刺激への反応として特定の遺伝子発現の調節を研究するために,この方法の有用性を実証する.

主な方法:

固定された組織部内で直接mRNAの逆転写を含むin situ転写技術を開発し,適用しました.
特定のcDNA合成のために,プロオピオメラノコルチン (POMC) mRNAを補完するオリゴヌクレオチドプライマーを使用した.
ラットの下垂体部分における放射性標識のPOMCcDNAの解剖学的な局所化のために,自動放射学を用いた.
中間葉におけるPOMC mRNA信号の強度に対するドーパミン作用薬の影響を調査した.

主要な成果:

in situトランスクリプションとautoradiographyを使用して,固定されたラット下垂体部分におけるPOMC mRNAの急速な解剖学的局所化を成功裏に達成しました.
中間葉のPOMC mRNA信号の強度がドーパミン作用薬の治療に敏感であることが示された.
トランスクリプトは,cDNAの識別とクローニングなどのさらなる分析のために,組織部から解読することができることが示されました.

結論:

In situ トランスクリプションは,完ぺきな組織部内の特定のmRNAトランスクリプトの解剖学的局所化のための強力で敏感な方法です.
この技術は,POMC mRNAレベルにおける薬物誘発による変化が示すように,遺伝子発現の調節を調査するのに適しています.
トランスクリプトを解析する能力は,分子クローニングと局所的なcDNAの特徴化におけるさらなる応用を提供します.

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