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RNA-seq03:21

RNA-seq

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RNA sequencing, or RNA-Seq, is a high-throughput sequencing technology used to study the transcriptome of a cell. Transcriptomics helps to interpret the functional elements of a genome and identify the molecular constituents of an organism. Additionally, it also helps in understanding the development of an organism and the occurrence of diseases. 
Before the discovery of RNA-seq, microarray-based methods and Sanger sequencing were used for transcriptome analysis. However, while...
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In-situ Hybridization02:31

In-situ Hybridization

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In situ hybridization (ISH) is a technique used to detect and localize specific DNA or RNA molecules in cells, tissue, or tissue sections using a labeled probe. The technique was first used in 1969 for the investigation of nucleic acids. It is currently an essential tool in scientific research and clinical settings, especially for diagnostic purposes.
Types of probes and labels
A probe is a complementary strand of DNA or RNA that binds to corresponding nucleotide sequences in a cell. Many...
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Ribosome Profiling02:24

Ribosome Profiling

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Ribosome profiling or ribo-sequencing is a deep sequencing technique that produces a snapshot of active translation in a cell. It selectively sequences the mRNAs protected by ribosomes to get an insight into a cell’s translation landscape at any given point in time.
Applications of ribosome profiling
Ribosome profiling has many applications, including in vivo monitoring of translation inside a particular organ or tissue type and quantifying new protein synthesis levels.
The technique...
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Je Hyuk Lee1, Evan R Daugharthy, Jonathan Scheiman

  • 1Wyss Institute, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA.

Science (New York, N.Y.)
|March 1, 2014
PubMed
まとめ

光 in situ RNA 配列解析 (FISSEQ) により,研究者は細胞内の遺伝子発現とRNAの局所化をマップすることができます. この方法は,細胞の過程を in situ で研究するために単一分子検出を強化します.

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科学分野:

  • 分子生物学は分子生物学である.
  • ゲノミクスゲノミクスとは
  • 細胞生物学 細胞生物学

背景:

  • 空間的遺伝子発現を理解するには,細胞内のRNAの正確な局所化が必要です.
  • 現在の方法は,単一分子検出のための光学解像度と信号騒音の限界に直面しています.

研究 の 目的:

  • 高解像度空間トランスクリプトミクスのための光インシットRNAシーケンシング (FISSEQ) を導入する.
  • FISSEQのRNA発現と局所化を in situで分析する能力を実証する.

主な方法:

  • クロスリンクされた互補DNA (cDNA) のアンプリコンのインシット配列化を伴うFISSEQを開発しました.
  • FISSEQをシミュレートされた創傷治癒アッセイを用いて,ヒトの原発性線維芽細胞に適用した.
  • 30塩基で8102の遺伝子を in situ で読み出すことができました.

主要な成果:

  • ヒトの線維芽細胞におけるRNA発現と局所化のマッピングに成功しました.
  • FISSEQは,組織断面および全身の胚との互換性を実証しました.
  • 単一分子検出における光学解像度とノイズ信号の制限を軽減します.

結論:

  • FISSEQは,遺伝子要素を現地で大規模に並行的に検出するための強力なプラットフォームを提供します.
  • 細胞フェノタイプ,遺伝子調節,細胞環境の調査を可能にします.
  • シングルヌクレオチド解像度での遺伝子発現の空間的組織の研究を進める.