カチオン性リポソーム媒介トランスフェクション | JoVE Visualize

科学分野:

バイオケミストリーバイオケミストリー
分子生物学は分子生物学である.
細胞生物学細胞生物学

背景:

哺乳類の細胞に遺伝子の配送は,研究と治療において極めて重要です.
効率的で安全なトランスフェクション方法の開発は,依然として大きな課題です.
脂質ベースのシステムは,核酸の配送のための有望な道を提供します.

研究の目的:

新しい脂質,DOTMAを紹介し,特徴づけること.
DNAとRNAの変異に対するDOTMAベースのリポソームの有効性を評価する.
サスペンション細胞およびハイブリドオマを含む様々な哺乳類細胞のトランスフェクション効率を評価する.

主な方法:

DOTMA脂質の合成と特徴付けについて.
DOTMAを用いたユニラメラーリポソームの形成.
DOTMAリポソームをプラズミドDNAとsiRNAで複合する.
粘着性およびサスペンション性哺乳類の細胞系 (例えばハイブリドトーマ) でのトランスフェクションアッセイ.
レポーター遺伝子発現または標的遺伝子のノックダウンによるトランスフェクション効率の評価.

主要な成果:

DOTMAは,安定したユニラメラーリポソームを成功裏に形成しました.
DOTMA-リポソーム複合体は,DNAとRNAの両方を哺乳類の細胞に効率的に送り込みました.
様々な細胞タイプ,特にサスペンション細胞とハイブリドオマを含む様々な細胞で,高い感染率が観察されました.
脂質は良好な生物互換性を示し,細胞の吸収を促進しました.

結論:

DOTMAは,遺伝子配送のためのリポソームを作成するための非常に効果的な脂質です.
DOTMAベースのリポソームは,多様な哺乳類の細胞モデルにおける核酸変異のための汎用的で効率的なツールです.
この新しい脂質は,遺伝子配送を困難な細胞タイプに容易にし,転移の可能性を拡大します.