マウスの肝臓におけるCRISPR媒介による癌遺伝子の直接変異

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 遺伝学 遺伝学とは
• がん研究 がん研究

背景:

• 伝統的なマウスがんモデルは,トランスジェネシスまたは胚性幹細胞の遺伝子ターゲティングに依存しています.
• 癌のインビヴォモデリングのための新しい方法の開発は,機能的ゲノミクスにとって極めて重要です.

研究 の 目的:

• 野生型のマウスにおける肝がんモデルのインビボ生成のための新しいCRISPR/Casシステムを確立する.
• 肝臓における直接変異した腫瘍抑制遺伝子および腫瘍遺伝子の実現可能性を実証する.

主な方法:

• 活体内では,Ptenとp53を標的としたCRISPR/Cas9プラズミッドと単一ガイドRNA (sgRNA) を供給するために,水力ダイナミック注入を利用した.
• Cas9プラズミッドをスグRNAとDNAドナーオリゴヌクレオチドと併用して注入し,β-カタニン遺伝子の特定の変異を導入する.

主要な成果:

• CRISPR媒介のPten変異は,フェノコピーされた遺伝子消去効果をもたらし,脂質の蓄積とAktの高濃度リン酸化を引き起こします.
• 同時にPtenとp53を標的とした誘発性肝臓腫瘍は,Cre-LoxPモデルの腫瘍に似ています.
• 生成した肝臓腫瘍におけるPtenとp53のバイアレル変異が確認された.
• 標的型遺伝子編集による核β-カテニンの局所化を持つ肝細胞を成功裏に生成した.

結論:

• CRISPR/Casシステムは,肝臓の癌遺伝子の直接変異のための実行可能で迅速なアプローチを提供します.
• この方法は,肝がんモデルの急速な開発と機能的ゲノミクス研究のための新しい道を示しています.