iDISCO:ボリュームイメージングのために,大きな組織サンプルを免疫的にマークするためのシンプルで迅速な方法.
Nicolas Renier1, Zhuhao Wu1, David J Simon1
1Laboratory of Brain Development and Repair, The Rockefeller University, 1230 York Avenue, New York, NY 10065, USA.
Cell
|November 24, 2014
まとめ
私たちは,全臓器や胚の3Dイメージングのための迅速かつ手頃な価格の方法であるiDISCOを開発しました. このテクニックは,大きくクリアされた組織内の分子構造の詳細な可視化が可能で,神経生物学の研究に役立ちます.
科学分野:
- 神経科学は神経科学である.
- 分子生物学は分子生物学である.
- バイオテクノロジー バイオテクノロジー
背景:
- 大きな組織における分子的に標識された構造の3D視覚化は,挑戦的です.
- 既存の方法は,しばしば複雑で,時間がかかり,または高価です.
研究 の 目的:
- iDISCOを導入する. iDISCOは,完全なマウントの免疫標識と,クリアされた大きな生物サンプルの3Dボリュームイメージングのためのシンプルで,迅速で,安価な方法である.
- iDISCOの様々な抗体とトランスジェニックレポーターとの互換性を実証する.
- 複雑な組織における神経変性分析のためにiDISCOを適用する.
主な方法:
- ホールマウントの免疫マーキングと組織クリアリングのためのiDISCOプロトコル.
- クリアされたサンプル (生理間マウスの胚,脳や腎臓などの成人の臓器) の体積イメージング.
- 28個の抗体と緑色光タンパク質 (GFP) のレポーターによる互換性試験.
主要な成果:
- iDISCOは,さまざまな大きな組織の全マウント免疫マーキングと3Dボリュームイメージングを成功裏に可能にしました.
- この方法は,内生抗原とトランスゲンレポーターを標的とする抗体を含む,幅広い抗体との互換性を示した.
- 変性ニューロンへの応用により,アポプトティックニューロン数の予期せぬ変動が明らかになり,単一の変性軸索とCaspase-3の分裂を in vivoで可視化することができました.
結論:
- iDISCOは,複雑な組織における免疫標識された構造の3Dイメージングのための効果的でアクセシブルな技術です.
- この方法は,無傷な臓器や胚における細胞および亜細胞構造の研究を容易にする.
- iDISCOは,神経変性プロセスに関する新しい洞察を提供します.


