RNAベースの光バイオセンサは,セカンドメッセンジャーサイクリックdi-AMPの生細胞イメージングを目的としています

科学分野:

• 微生物学 微生物学とは
• 分子生物学は分子生物学である.
• バイオケミストリー バイオケミストリー

背景:

• 周期性ダイ-AMP (cdiA) は,細菌における重要な第2のメッセンジャーであり,代謝と細胞壁の整合性に影響を与えます.
• Listeria monocytogenesのcdiA濃度の低下は,抗生物質に対する感受性の増加と相関しています.
• cdiAのシグナル伝達経路は,様々な細菌種やアーカイアで保存されています.

研究 の 目的:

• 生きた細菌の細胞内cdiAレベルを視覚化するための新しい光バイオセンサを開発する.
• フォスフォディエステラーゼPdeAの特徴と,ディヌクレオチドサイクラース活性に対するスクリーンの作成.
• クロストリジウム・ディフィシルとアーカイアにおけるDisA型タンパク質の機能を検証する.

主な方法:

• Spinach2アプタマーとcdiAリボスイッチリガンド結合ドメインの融合により,光バイオセンサが生成されます.
• 生きているListeria monocytogenesの細胞内cdiA濃度のインビボ画像.
• ディヌクレオチドサイクラースの活性をスクリーニングするためのフローサイトメトリーアッセイの開発.

主要な成果:

• リアルタイム cdiA イメージングのための光バイオセンサを成功裏に生成し,利用しました.
• フォスフォディエステラーゼ PdeA.の触媒領域を決定した.
• クロストリジウム・ディフィシルとメタノカルドコッカス・ジャナシイのDisA型タンパク質の酵素活性が確認されました.

結論:

• RNAベースのバイオセンサは,グラム陽性細菌の有効な in vivo メタボライトイメージングを可能にします.
• この研究は,最初のアーカイアル・ディヌクレオチド・サイクラスを検証し,これらの酵素の既知のレパートリーを拡張しました.
• 開発されたバイオセンサは,さまざまな微生物領域におけるcdiAシグナル伝達とスクリーニング酵素活動の研究のための強力なツールを提供します.