特定タンパク質グリコフォームの生細胞ラベル付け,近接強化バイオオートゴナル結合による
Peter V Robinson1, Gabriela de Almeida-Escobedo1, Amber E de Groot1
1Departments of Chemistry and Molecular and Cell Biology and the Howard Hughes Medical Institute, University of California , Berkeley, California 94720, United States.
生体細胞の特定のタンパク質の 糖化反応を検出するために サイクルオクトイン-アプタマー結合体を開発しました この新しい方法は,様々な検出技術を用いて,グリコシル化エピトープの正確な分析を可能にします.
科学分野:
- 生物化学
- 分子生物学
- 化学生物学
背景:
- 特定のタンパク質の翻訳後の改変,特にグリコシレーションを検出することは困難です.
- 既存の方法は,タンパク質の文脈内のグリコシル化エピトープの特異性を欠いていることが多い.
研究 の 目的:
- タンパク質特異のグリコシレーションを検出するための新しい戦略を開発する.
- 生体細胞のグリコシル化エピトープを 選択的に標的に検知できる反応剤を作る
主な方法:
- アジドシュガーラベルを貼ったグリカンに選択的に結合するために,サイクロオクチン-アプタマー結合物を利用した.
- 特定の細胞表面グリコプロテインを標的にする方法を適用した.
- マススペクトロメトリー,ウェスタン・ブロッティング,フロー・サイトメトリーを用いた検証された検出.
主要な成果:
- アプタマー結合体が標的タンパク質にアジド糖ラベルを貼ったグリカンに選択的に結合することが示されている.
- 2つの異なる細胞表面グリコプロテインに対してアプタマー結合体を成功裏に特徴づけた.
- タンパク質シアロフォームの検出に 反応剤の有用性を示した.
結論:
- サイクロオクチン-アプタマー結合体は,タンパク質特異のグリコシレーションを検出するための堅固な基盤を提供します.
- この技術は,細胞プロセスにおけるグリコシレーションの役割の調査を容易にする.
- このアプローチは,様々な細胞表面標的とグリコシレーションパターンを研究するために適応可能である.
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