大型タンパク質および超分子複合体における残留二極結合の測定のための溶液NMR実験
Alexander Eletsky1, Surya V S R K Pulavarti1, Victor Beaumont1
1Department of Chemistry and ‡Department of Biological Sciences, State University of New York at Buffalo , Buffalo, New York 14260, United States.
新しいNMR実験である2D SE2 J-TROSYは,200 kDa以上の大きなタンパク質のN-H残極二極結合 (RDC) を測定する. これは複雑な生物学的分子の 構造分析を進めています
科学分野:
- バイオ物理学
- 構造生物学
- 核磁共振 (NMR) スペクトロスコーピー
背景:
- NMR 残留二極結合 (RDC) は,タンパク質の構造と動態の決定に不可欠です.
- 大きなタンパク質 (> 200 kDa) と超分子複合体のRDCを測定することは依然として困難です.
研究 の 目的:
- 2D SE2 J-TROSYという新しい溶液NMR実験を紹介する.
- 大きなタンパク質システムの N-H RDC の測定を可能にします.
- 構造的検証,精錬,複合体の動的変化の分析を容易にする.
主な方法:
- 2D SE2 J-TROSY NMR実験の開発と応用
- 93 kDa Trp RNA結合減弱タンパク質複合体の N-H RDC の測定
- 750MHz (1) Hの共鳴周波数を使用した.
主要な成果:
- 93 kDaのタンパク質の正確なN-H RDCを120nsの相関時間で測定しました.
- 以前より2倍の大きさのシステムを分析する能力を示した.
- 残留 (1) H密度に対する方法の堅実性を示した.
結論:
- 2D SE2 J-TROSY実験は,RDC分析に適したタンパク質のサイズ範囲を大幅に拡大します.
- この技術は,既存の構造を精錬し,大きなバイオ分子組の構造動態を特徴づけるのに役立ちます.
- より高い磁場 (例えば1GHz) の将来のアプリケーションは,より大きなシステムのためのRDC測定を約束します.
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08:0915N CPMG Relaxation Dispersion for the Investigation of Protein Conformational Dynamics on the µs-ms Timescale
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14:55Atomic Scale Structural Studies of Macromolecular Assemblies by Solid-state Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy
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