関連する実験動画

Updated: Apr 3, 2026

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

Published on: April 2, 2016

BCL11A増強剤の解剖は,Cas9媒介による in situ 飽和型変異による

Matthew C Canver¹, Elenoe C Smith¹, Falak Sher¹

¹Division of Hematology/Oncology, Boston Children's Hospital, Department of Pediatric Oncology, Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Stem Cell Institute, Department of Pediatrics, Harvard Medical School, Boston, Massachusetts 02115, USA.

|September 17, 2015

まとめ

研究者は,統合されたCRISPR- Cas9スクリーニングを使用してBCL11Aエリソイド増強剤の重要な特徴をマッピングしました. この研究は,胎児のヘモグロビンを再誘導する標的として強化剤を検証し,将来のゲノム編集療法に情報を提供する.

科学分野:

ゲノミクス
分子生物学
発達生物学

背景:

増強剤は細胞のアイデンティティに不可欠であり,しばしばクロマチンのマークと機能獲得研究によって識別される.
機能喪失の研究は,本来のゲノム的な文脈で強化剤の必要性を確認するために不可欠です.
胎児のヘモグロビン濃度に関連したBCL11Aの赤血球増強剤は,以前,赤血球BCL11A発現に不可欠なマウスオートログと特定されました.

研究の目的:

CRISPR- Cas9ガイドRNAライブラリを使用したヒトとマウスのBCL11Aエリソイド増強剤のインサイト飽和変異を行う.
これらの強化剤の最小限の特徴と脆弱性を特定する.
胎児のヘモグロビン再誘導のための治療標的としてBCL11Aエリソイド強化剤を検証する.

主な方法:

飽和型変異を誘導するパリンドロミックリピート (CRISPR) -Cas9ガイドRNAライブラリの開発と応用.
人間とマウスの機能強化剤のインシット尋問
検証のために人間の原始遺伝子の編集とマウスの変異.

主要な成果:

BCL11Aエリトロイド強化剤内の重要な最小配列と離散的な脆弱性の特定
人間とマウスの強化剤の機能が保存されているが,構造は異なる.
実験的編集とトランスジェネシスによる胎児のヘモグロビン再誘導の標的としてBCL11Aエリソイド強化剤の検証.

結論:

BCL11A赤色素増強剤は重要な特性を有しており,その中には霊長類特異性があるようです.
BCL11A赤血球増強剤は,胎児のヘモグロビンを再誘導することを目的とした治療的ゲノム編集の有効な標的です.
開発されたスクリーニングアプローチは,非コーディングゲノム要素の機能分析に広く適用できます.

さらに関連する動画

Dissection of Enhancer Function Using Multiplex CRISPR-based Enhancer Interference in Cell Lines

Dissection of Enhancer Function Using Multiplex CRISPR-based Enhancer Interference in Cell Lines

Published on: June 2, 2018

Using Next Generation Sequencing to Identify Mutations Associated with Repair of a CAS9-induced Double Strand Break Near the CD4 Promoter

Using Next Generation Sequencing to Identify Mutations Associated with Repair of a CAS9-induced Double Strand Break Near the CD4 Promoter

Published on: March 31, 2022

関連する概念動画

Homologous Recombination

Homologous Recombination

The basic reaction of homologous recombination (HR) involves two chromatids that contain DNA sequences sharing a significant stretch of identity. One of these sequences uses a strand from another as a template to synthesize DNA in an enzyme-catalyzed reaction. The final product is a novel amalgamation of the two substrates. To ensure an accurate recombination of sequences, HR is restricted to the S and G2 phases of the cell cycle. At these stages, the DNA has been replicated already and the...

Conservative Site-specific Recombination and Phase Variation

Conservative Site-specific Recombination and Phase Variation

Because the DNA segments are cut and reorganized in a direction-specific manner, site-specific recombination has emerged as an efficient genetic engineering technique. Flippase and Cyclization recombinases or Flp and Cre, respectively, are two members of the tyrosine recombinase family derived from bacteriophages, that are used to mediate site-specific DNA insertions, deletions, and targeted expression of proteins in mammalian cell lines.
The recognition sites for Cre recombinase called LoxP...