関連する実験動画
Updated: Mar 27, 2026

CIRCLE-Seq for Interrogation of Off-Target Gene Editing
Published on: November 1, 2024
高精度CRISPR-Cas9核酸で,ゲノム全体で検出可能なオフターゲット効果はありません
Benjamin P Kleinstiver1,2, Vikram Pattanayak1,2, Michelle S Prew1
1Molecular Pathology Unit, Center for Cancer Research, and Center for Computational and Integrative Biology, Massachusetts General Hospital, Charlestown, Massachusetts 02129, USA.
新しい高精度CRISPR-Cas9変種であるSpCas9-HF1は,ゲノム編集における望ましくない非標的変異を大幅に減少させます. この高精度なツールは 標的の活動を維持し 研究や治療の応用に より安全な代替手段を提供します
科学分野:
- 分子生物学
- 遺伝学
- バイオテクノロジー
背景:
- CRISPR-Cas9は 強力なゲノム編集ツールです
- 標的外変異は臨床と研究での応用を制限する.
- 対象外効果を減らすための現在の方法には限界があります.
研究 の 目的:
- 標的外変異が少ない高信頼性CRISPR-Cas9変異種を開発する.
- 新しい変異体の標的での活動と特異性を評価する.
- 研究と治療のための より安全なゲノム編集ツールを提供するためです
主な方法:
- SpCas9-HF1という名前のStreptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9) の高精度変種を設計した.
- 特殊なDNAの相互作用を最小限に抑えるように設計された SpCas9-HF1.
- ヒト細胞における様々な単一ガイドRNA (sgRNA) を用いて,標的上の活性と標的外の変異を評価した.
- ゲノム全体のブレイクキャプチャと,突然変異の検出のための標的配列を採用した.
主要な成果:
- SpCas9-HF1は,試験されたsgRNAの85%以上で,野生型のSpCas9と比較可能な標的上の活性を示した.
- SpCas9- HF1では,重複した標的部位でも,標的外変異は検出できず,または有意に減少した.
- この変種は 意図しない遺伝的変異を最小限に抑え 特殊な精度を示しました
結論:
- SpCas9-HF1は,ゲノム編集のための野生型のSpCas9に非常に正確で効果的な代替案を提供します.
- この高精度変種は 研究や治療用途の安全性を高めます
- 設計戦略は,他のCRISPR-RNA誘導核酸の特異性を改善するために適用できます.
さらに関連する動画
11:37Using Sniper-Cas9 to Minimize Off-target Effects of CRISPR-Cas9 Without the Loss of On-target Activity Via Directed Evolution
Published on: February 26, 2019
11:35Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells
Published on: June 16, 2017
関連する概念動画
CRISPR/Cas9 Genome Editing
CRISPR
CRISPR
CRISPR and crRNAs
The CRISPR-Cas system stores a copy of foreign DNA in the host genome and uses it to identify the foreign DNA upon reinfection. CRISPR-Cas has three different...
Homologous Recombination