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CRISPR01:59

CRISPR

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Genome editing technologies allow scientists to modify an organism’s DNA via the addition, removal, or rearrangement of genetic material at specific genomic locations. These types of techniques could potentially be used to cure genetic disorders such as hemophilia and sickle cell anemia. One popular and widely used DNA-editing research tool that could lead to safe and effective cures for genetic disorders is the CRISPR-Cas9 system. CRISPR-Cas9 stands for Clustered Regularly Interspaced...
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David A Nelles1, Mark Y Fang2, Mitchell R O'Connell3

  • 1Department of Cellular and Molecular Medicine and Institute for Genomic Medicine, University of California, San Diego, La Jolla, CA 92037, USA; Materials Science and Engineering Graduate Program, University of California, San Diego, La Jolla, CA 92093, USA.

Cell
|March 22, 2016
PubMed
まとめ

研究者らは,CRISPR/Cas9という新しいツール (RCas9) を開発し,遺伝子タグを必要とせずに,生きている細胞のRNAを追跡しました. このRNAターゲティングのCas9システムは,内生メッセンジャーRNA (mRNA) をリアルタイムで可視化することができます.

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科学分野:

  • 分子生物学
  • 遺伝学
  • バイオテクノロジー

背景:

  • CRISPR/Cas9システムは ゲノム編集に強力です
  • 現在のRNAターゲティング方法は,しばしば外因的なタグを必要とし,柔軟性を制限します.
  • 内生性RNAの分析とイメージングには,プログラム可能なRNAターゲティングツールが必要です.

研究 の 目的:

  • プログラム可能なRNAターゲティングのためのニュクレアース無活性CRISPR/Cas9システムを実証する.
  • 生体細胞の内生的な RNA トラッキングとイメージングを可能にします
  • mRNAの局所化と密輸のダイナミクスを調査する.

主な方法:

  • 核酵素に活性化されていないStreptococcus pyogenes CRISPR/Cas9 (RCas9) を利用し,RNA結合のために設計した.
  • 特定のメッセンジャーRNA (mRNA) のRCas9ターゲティングをプログラムするために使用されたガイドRNA (sgRNA)
  • 顕微鏡検査と光インシトゥハイブリデーションを用いてRCas9の局所化とmRNAの蓄積を観察した.

主要な成果:

  • 核局所化されたRCas9は,mRNAを標的とするsgRNAと結合すると,細胞質に輸出された.
  • ACTB,CCNA2,TFRC mRNAの蓄積は,RNAの粒子を観察した.
  • ACTB mRNAの時間解析による追跡が示され,密輸のダイナミクスを明らかにした.

結論:

  • RCas9は,生体細胞内の内生性RNAを追跡するためのプログラム可能なタグフリーメソッドを提供します.
  • このRNAを標的にするCas9システムは,mRNAの局所化とダイナミクスの研究を容易にする.
  • この発見は,ゲノムのCRISPRツールに類似したRNA生物学研究のための新しいツールを確立しています.