CRISPR/Cas9を用いた特定の同位体および異位体変異の効率的な導入

Dominik Paquet¹, Dylan Kwart¹, Antonia Chen¹

¹Laboratory of Brain Development and Repair, The Rockefeller University, 1230 York Avenue, New York, New York 10065, USA.

Nature

|April 28, 2016

まとめ

この研究は,正確な遺伝子改変のためのCRISPR/Cas9ゲノム編集フレームワークを導入します. CORRECT法では,同質指向修復 (HDR) の効率を高め,アルツハイマー病のような遺伝疾患の正確なモデリングを可能にします.

科学分野:

分子生物学
遺伝学
バイオテクノロジー

背景:

CRISPR/Cas9は遺伝子編集を可能にしますが,正確な変異に対するホモロジー指向修復 (HDR) は非効率です.
現在の方法は,病気のモデル化のための異性体の突然変異の標的化に苦労しています.
非同型末端結合 (NHEJ) は,しばしば望ましくない挿入/削除 (インデル) を導入します.

研究の目的:

CRISPR/Cas9の効率的で正確なゲノム編集フレームワークを開発し,選択的なモノおよびバイアレル配列変更を行う.
遺伝子疾患のモデリングにおけるホモロジー・ディレクテッド・リペア (HDR) の効率と精度を向上させる.
単一のアレルでの標的型変異ノックインを可能にし,異性体の変異をモデル化します.

主な方法:

CRISPR/Cas9ゲノム編集フレームワークを開発し,静かなCRISPR/Casブロック変異を組み込みました.
"CORRECT"と呼ばれる傷跡のないゲノム編集方法を確立しました
変異の組み込み率と二重鎖断裂 (DSB) までの距離の関係を利用して,ジゴス性を制御した.

主要な成果:

モノとバイアレル配列の変化の高効率で正確な導入を達成しました.
静かなブロック変異を組み込むことでHDRの精度が劇的に向上しました.
ヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞でヒト誘発性多能幹細胞

結論:

開発された枠組みとCORRECTメソッドは,CRISPR/Cas9を用いた効率的で正確な遺伝子編集を容易にする.
このアプローチは,正確な疾患モデリングのために,ジゴシティの予測可能な制御を可能にします.
特定の配列の変更を効率的に導入することで,ヒトの病気の研究を容易にする.

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