Vivoでは,設計されたソルターゼ変種を用いた様々なアミンによるサイト固有のタンパク質タグ付けを行う
Jeff E Glasgow1, Marc L Salit1, Jennifer R Cochran2
1National Institute of Standards and Technology , Stanford, California 94305, United States.
Journal of the American Chemical Society
|June 10, 2016
まとめ
この研究は,エンジニアリングされた酵素変種を用いた新しいタンパク質改変法を示しています. このアプローチは,活体細菌内でさえも,多様な化学タグを持つ機能化されたタンパク質の費用対効果の高い生産を可能にし,浄化の必要性を排除します.
科学分野:
- 生物化学
- 化学生物学
- 合成生物学
背景:
- 化学酵素によるタンパク質改変により,穏やかな条件下で精密な生物結合が可能になる.
- 既存の方法は,高い基板コスト,タグの複雑さ,低収量,浄化問題などの制限に直面しています.
研究 の 目的:
- より汎用的で費用対効果の高い化学酵素によるタンパク質改変戦略を開発する.
- 広範な化学タグ付けのための エンジニアリング酵素の変数の有用性を実証する.
主な方法:
- Staphylococcus aureus sortase Aの高度に活性化した変種を使用した.
- タンパク質発現のための最小のLPXTGタグを使用した.
- タンパク質をタグ付けするために,バイオオルトゴナル機能群を含む,商業的に利用可能な様々な小さなアミンを適用した.
- 実験室内および生きたエシェリキア・コライでタグ付け反応を行った.
主要な成果:
- 設計されたソルターゼA変種は,様々な小さなアミンで乱交的な活性を示した.
- バイオオルトゴナルを含む多様な機能群を持つタンパク質のタグ付けが成功しました.
- In vivo タンパク質機能化は,生きた大腸菌で実証された.
- この方法は,追加の浄化ステップなしで,タグ付けされたタンパク質の直接生産を可能にしました.
結論:
- この新しい化学酵素学的アプローチは,タンパク質の機能化のためのツールキットを大幅に拡張します.
- この方法は,化学的に改造されたタンパク質を生産するためのシンプルで,安価で,スケーラブルな経路を提供します.
- タンパク質の生産と機能化のワークフローを効率化します.
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