エンジニアリングされたNEDD8リガスを用いた小分子タンパク質標的の直接近接タグ付け
Zachary B Hill1, Samuel B Pollock1, Min Zhuang1
1Department of Pharmaceutical Chemistry and ‡Department of Cellular and Molecular Pharmacology, University of California , San Francisco, California 94158, United States.
Journal of the American Chemical Society
|September 15, 2016
まとめ
研究者は小さな分子のタンパク質標的を 特定するための新しい近接タグ付け方法を開発しました この技術は,特定の小分子に結合するタンパク質をラベルにするために設計されたリガスを使用し,薬物発見と化学探査の開発を支援します.
科学分野:
- 生物化学
- 化学生物学
- 分子生物学
背景:
- 生物活性小分子のためのタンパク質標的を特定することは 薬の発見と化学探査の開発に不可欠です
- アクティビティベースのプローブや フォトクロスリンクなどの既存の方法は,標的の識別に限界があります.
- 小さな分子を結合するタンパク質に 直接的にラベルを貼ることは 約束された代替アプローチです
研究 の 目的:
- 小分子に結合するタンパク質の直接的な近接タグ付けのための新しい方法を開発する.
- 小分子結合タンパク質の共性ラベリングのための乱交性リガスを設計する.
- タンパク質に固有の結合物質を特定する方法の有効性を検証する.
主な方法:
- NEDD8結合酵素 (Ubc12) を基にした乱交リガスを設計した.
- エンジニアリングされたリゲーゼを 興味のある小分子に共性的に結合した.
- 標的タンパク質の表面ライシンを標識するために,バイオチニル化NEDD8誘導体を使用した.
- ダサチニブと他のタンパク質とリガンドの相互作用に適用した.
主要な成果:
- 複合細胞溶解体における既知の内生タンパク質結合体のダサチニブ誘導のNEDDylationが実証された.
- エンジニアリングされたリガゼの合理的な変異により,NEDDylationの効率が向上しました.
- キナーゼと他の2つのタンパク質-リガンドの相互作用に対して,相性指向のNEDDylationを成功裏に適用した.
- 小分子結合に直接タンパク質を標識する能力を示した.
結論:
- 小分子標的の識別のための効果的な近接タグの方法を開発しました.
- エンジニアリングされたリガゼとNEDDylationアプローチは,直接的で直角的な戦略を提供します.
- この技術は,タンパク質の標的を特定することによって,新しい化学的探査機と治療薬の発見を容易にする.
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