酵母HAP2およびHAP3活性化剤は,CYC1のアップストリーム活性化部位UAS2に結合し,相互依存しています

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• イースト遺伝学 イースト遺伝学
• トランスクリプションに関する規則

背景:

• イーストのCYC1遺伝子は,転写活性化のために特定の規制要素を必要とします.
• HAP2およびHAP3遺伝子は,このプロセスに関与する調節タンパク質をコードする.

研究 の 目的:

• CYC1上流活性化部位 (UAS2UP1) にHAP2とHAP3の結合メカニズムを調査する.
• HAP2とHAP3がDNAに独立して結合するか,相互依存して結合するかどうかを判断する.

主な方法:

• 酵母抽出物を用いた電泳運動シフトアッセイ (EMSA)
• プロテイン-DNA複合体の形成分析は,ポリアクリラミドゲルを非自然化することによって行われます.
• DNA結合部位を特定するためのメチル化干渉足跡.
• 融合タンパク質 (HAP2/HAP3とβ-ガラクトシダゼ) と変異株を用いたタンパク質-DNA相互作用の分析.

主要な成果:

• HAP2とHAP3の両方がUAS2UP1サイトに結合し,単一のタンパク質-DNA複合体 (複合体C) を形成します.
• 複合体Cの形成は,機能的なHAP2およびHAP3遺伝子の存在に依存し,相互依存の結合を示しています.
• 結合部位はTGATTGGTとして特定され,高級エウカリオットに存在するCCAATボックスの同型である.

結論:

• HAP2およびHAP3タンパク質はUAS2UP1部位に相互依存して結合し,単一の機能複合体を形成します.
• この相互依存の結合メカニズムは,CYC1遺伝子の転写活性化に極めて重要です.
• この発見は,異なった生物の特定のDNA配列に結合する複数の遺伝子製品を含む転写調節の保存されたメカニズムを示唆しています.