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E. coliで表現された亜鉛指のモチーフは,DNAに直接特定の結合を in vitro で折りたたまれています

K Nagai¹, Y Nakaseko, K Nasmyth

¹MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, UK.

|March 17, 1988

まとめ

この研究は,SWI5タンパク質の分離された3指ドメインが,DNA結合のために亜鉛を必要としていることを示しています. このドメインだけでは,配列特異のDNA認識に十分であり,遺伝子調節におけるその役割を強調しています.

科学分野:

分子生物学は分子生物学である.
タンパク質とDNAの相互作用
イースト遺伝学イースト遺伝学

背景:

亜鉛指モチーフは,Xenopus転写因子IIIA (TFIIIA) や酵母SWI5.5を含む規制タンパク質に含まれるDNA結合ドメインです.
TFIIIAの亜鉛指はDNAを結合することが知られているため,SWI5.5の3つのタンデム亜鉛指にも同様の機能があることを示唆しています.

研究の目的:

イーストの転写活性化剤SWI5.5のシーケンス固有のDNA結合における亜鉛指ドメインの役割を調査する.
単離されたSWI5亜鉛指領域の金属要件とDNA結合特性を決定する.

主な方法:

Escherichia coli の SWI5 の 89 アミノ酸,三指の亜鉛ドメインを分割可能な融合タンパク質として表現した.
デナチュレーション条件下で融合タンパク質を浄化し,それをin vitroで再折りたたむ.
DNA結合特異性を評価するためにDNase I保護アッセイを使用しました.

主要な成果:

亜鉛は,SWI5亜鉛指領域によるDNAのシーケンス固有の認識に不可欠です.
SWI5の孤立した三指ドメインは,十分な配列特異的なDNA結合活性を示した.
実験システムは,分離されたポリペプチドの金属要求およびDNA結合能力の直接的な研究を可能にしました.

結論:

SWI5タンパク質内の3つのタンデム亜鉛指は,配列特異のDNA結合に不可欠です.
この孤立ドメインは,DNA認識において機能的に活発であり,転写調節におけるその役割をサポートしています.
この発見は,SWI5亜鉛指ドメインのDNA結合機能の直接的な証拠を提供する.

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