酵母HAP2およびHAP3:異体複合体の転写活性化剤

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• イースト遺伝学 イースト遺伝学
• タンパク質とDNAの相互作用

背景:

• 遺伝子転写の調節は,細胞機能にとって極めて重要です.
• イーストのCYC1遺伝子 (イソ-1-サイトクロームc) は,呼吸器連鎖の重要な構成要素である.
• その転写は,UAS2のような上流活性化サイト (UAS) によって制御されます.

研究 の 目的:

• HAP2およびHAP3活性化剤がDNAを協力的に結合するか,または事前に組み立てられた複合体を形成するかどうかを決定する.
• UAS2媒介の転写活性化のメカニズムを解明する.

主な方法:

• HAP2からLexAへ,HAP3からβ-ガラクトシダゼへ,HAP2の遺伝子融合.
• 多重クロマトグラフィのステップを用いたタグされたタンパク質の浄化.
• 精製されたタンパク質複合体のUAS2結合活性評価.

主要な成果:

• LexA-HAP2とHAP3-β-ガラクソシダースの浄化に成功しました.
• 精製されたタンパク質はUAS2結合活性を維持した.
• コプリフィケーションにより,HAP2とHAP3はDNAが存在しない場合でも結合することが示されました.

結論:

• HAP2とHAP3は,DNA結合前に安定した多サブユニット複合体を形成します.
• この事前に形成された複合体は,酵母CYC1遺伝子転写をUAS2.2で調節するために不可欠です.