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Real Time RT-PCR02:57

Real Time RT-PCR

65.9K
Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction, or Real-time RT-PCR, is an analytical tool used to determine the expression level of target genes. The method involves converting mRNA to complementary DNA with the help of an enzyme known as reverse transcriptase, followed by the PCR amplification of the cDNA. These two processes can be performed simultaneously in a single tube or separately as a two-step reaction.
The real-time quantification of the number of amplified products is...
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  • 1Department of Chemistry, Stanford University , Stanford, California 94305, United States.

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|March 28, 2017
PubMed
まとめ
この要約は機械生成です。

この研究は,核酸検出のための新しい酵素のない方法を導入します. このテクニックは,より高いレベルの信号増幅を実現し,複雑なサンプルにおける繊細で特異的な遺伝子物質の識別を可能にします.

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科学分野:

  • 分子生物学
  • 生物化学
  • 分析化学

背景:

  • 核酸検出は生物学的過程を理解し,病気を診断するために不可欠です.
  • PCRのような現在の方法は複雑な手順 (サンプル準備,熱循環,酵素) を必要とします.
  • PCR以外の既存の方法は,低濃度の分析物質を検出するのに十分な信号増幅が欠けていることが多い.

研究 の 目的:

  • 核酸検出のための新しい非酵素的,同熱的,およびフッ素学的方法を開発する.
  • 線形法を上回る高度の信号増幅を実現する.
  • 高い感度と特異性を持つ複雑な生物学的マトリックスにおける核酸の直接検出を可能にする.

主な方法:

  • 信号増幅のための2段階のテンプレート化化学結合戦略.
  • 最初の反応は標的核酸配列によってテンプレートされます.
  • 最初の反応の積は,信号生成のための第二の反応をテンプレートします.

主要な成果:

  • 標的核酸の500アトモール (10 pM) の検出
  • シングルヌクレオチド解像度で 入れ替わりと消去を成功裏に特定できます
  • バクテリアの溶解物におけるrRNAの検出と,高通量分析のための可能性が示された.

結論:

  • 開発された方法は,従来の核酸検出技術に対して,シンプルで,敏感で,特定の代替手段を提供します.
  • その非酵素的および同熱的性質は,診療所診断を含む多様な用途に適しています.
  • 高度信号増幅は,微小な遺伝物質の検出のための線形増幅方法の限界を克服します.