サイトセレクティブ・プロテイン・フォトクロスリンクのための遺伝子コード化された2-アリル-5-カルボキシテトラゾール
Yulin Tian1, Marco Paolo Jacinto1, Yu Zeng2
1Department of Chemistry, State University of New York at Buffalo , Buffalo, New York 14260, United States.
Journal of the American Chemical Society
|April 20, 2017
まとめ
研究者らは細胞内のタンパク質の相互作用をマッピングするために 新しい写真クロスリンクを開発しました N-メチルピロレテトラゾール-ライシン (mPyTK) アナログは,ダイナミックなタンパク質とタンパク質の相互作用を研究するために高い効率を示しました.
科学分野:
- 生物化学
- 分子生物学
- 化学生物学
背景:
- 遺伝的にコードされた光クロスリンクは,生物系における一時的なタンパク質相互作用の研究に不可欠である.
- 既存の方法には効率性や場所特有の限界があります.
研究 の 目的:
- 新規の2 - アリル - 5 - カーボキシテトラゾール - リジン類 (ACTK) を光交互リンク剤として合成し,評価する.
- ダイナミックなタンパク質-タンパク質の相互作用のサイト特有のマッピングを in vivoで可能にします.
主な方法:
- ACTKのパネルの合成
- E. coliと哺乳類の細胞におけるアンバーコドン抑制を用いて,サイト特有のタンパク質への組み込み.
- フォトクロスリンクアッセイと既存のクロスリンクアサーとの比較
- Grb2-EGFRの相互作用をマッピングする応用.
主要な成果:
- N-メチルピロレテトラゾール-ライシン (mPyTK) は,大腸菌で強固で部位選択的な写真クロスリンクを証明した.
- mPyTKは,ダイアジリンベースのクロスリンカー (AbK) と比較して,インビトロでより高い光クロスリンク効率を示した.
- mPyTKは,Grb2に組み込まれると,刺激に依存するEGFRのフォトキャプチャを可能にしました.
結論:
- mPyTKは,生体細胞における一時的なタンパク質相互作用とそのインターフェイスをマッピングするための効果的な写真クロスリンクです.
- mPyTKとその関連合成酵素の開発は,細胞生物学の研究に強力なツールを提供します.
