RNA処理は,酵母CYC1メッセンジャーRNAの成熟した3'端を in vitroで生成する

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• イースト遺伝学 イースト遺伝学
• RNA 処理 RNA 処理

背景:

• 3'端のメッセンジャーRNA (mRNA) の正確な形成は,真核生物の遺伝子発現に極めて重要です.
• 以前は,トランスクリプションの終結が成熟したmRNAの3'端を生成する主なメカニズムと考えられていた.
• 酵母 mRNA 3' 末端の形成に関与する酵素機構を理解することは不可欠です.

研究 の 目的:

• Saccharomyces cerevisiaeにおける iso-1-cytochrome c mRNA (CYC1) の成熟した3'端を生成する酵素活性を調べる.
• イーストのプレ-mRNA処理に関与するエンドヌクレアース活動の性質と要件を特徴づける.
• エンドヌクレオリチス分裂とポリアデニレーションを含むmRNA 3'エンド生成の代替モデルを探求する.

主な方法:

• 前駆体mRNAのトランスクリプトをSaccharomyces cerevisiaeの全細胞抽出物でインキュベーションする.
• 精度,効率,および基板特異性を決定するために,インビトロ割れ物の分析.
• アデノシントリフォスファート (ATP) 依存性の評価と,特定の突然変異が分裂活動に及ぼす影響.

主要な成果:

• 酵母細胞のエキストラクトには,CYC1前mRNAのポリアデニレーション部位またはその近くで正確に分裂できるエンドヌクレアース活性が特定されました.
• 分裂活動は30-50%の効率を示し,ATPに依存しており,特定の酵母前mRNAに特異的であった.
• in vivo 3' 末端形成を廃止する変異は, in vitro で観察された分裂も廃止した.
• 細胞抽出物にも二次的ポリアデニレーション活性が検出されました.

結論:

• 酵母 mRNA 3'端の形成は,おそらく,エンドヌクレオリティク・クリバージ・イベントを含んでいる.
• 酵母mRNAの成熟した3'端は,エンドヌクレオリチス分裂とその後のポリアデニレーションの組み合わせによって生成される可能性があります.
• このメカニズムは,機能的なmRNA分子を生成するための転写終止の代替案を提供します.