乱雑なRNAアプタマーと赤または青のフッ素サイアニン染料からなるフッ素モジュール:選択,特徴化,およびバイオイメージング

科学分野:

• 分子生物学
• バイオテクノロジー
• 化学生物学

背景:

• RNAアプタマーとは,特定の標的と結合するために選択された核酸分子である.
• シアニン染料は生物学的イメージングで広く使用されているフッ素です.
• 調節可能な新型画像探査機の開発は 細胞生物学にとって極めて重要です

研究 の 目的:

• ダブルカラーの光能力を持つ新しいRNAアプタマーを開発する.
• 細胞表面の受容体標識に 2 機能のアプタマーを作る
• 細胞表面と内蔵受容体を区別するためのアプタメアの有用性を実証する.

主な方法:

• シアニン染料の選択のための指数関数濃縮 (SELEX) によるリガンドの系統的進化.
• アプタマー染料結合運動 (K_D) と光物理特性 (量子収量,光安定性) の特徴づけ
• 染料結合アプタマーと表皮成長因子受容体 (EGFR) 固有のアプタマーとの融合.

主要な成果:

• 単一のRNAアプタミーは,ジメチリンドール赤 (DIR) とオクサゾールチアゾール青 (OTB) の両方をサブマイクロモラーアフィニティで結合します.
• その結果,アプタマー染料複合体 (フッ素モジュール) は調節可能な光放射と高い光安定性を示す.
• 哺乳類の細胞に細胞表面EGFRを成功裏に標識した.
• 光色 (青/赤) のインシット切替は,結合染料の変更によって達成された.
• このシステムは,染料添加のタイミングに基づいて,細胞表面と内蔵EGFRの区別を可能にしました.

結論:

• 乱交型RNAアプタマーは,二色光成像のための汎用的なプラットフォームを提供します.
• 細胞表面受容体の標的付けとダイナミックな追跡を可能にします.
• この技術は,生細胞における受容体の局所と動態を区別するための新しいアプローチを提供します.