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Labeling DNA Probes03:31

Labeling DNA Probes

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DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...
9.5K
Tagging and Fusion Proteins01:24

Tagging and Fusion Proteins

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Proteins are involved in several cellular processes and biochemical reactions. Analyzing a specific protein of interest requires it to be isolated from the other proteins in the cell. This is achieved by overexpressing the specific gene in a suitable host to produce large quantities of the target protein. A tag or label is recombined with the gene to produce a fusion protein containing the target protein and the tag. The tags on these fusion proteins can then be used for easy detection and...
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設計された基本ペプチドの金属依存DNA認識と細胞内化

Soraya Learte-Aymamí1, Natalia Curado1, Jéssica Rodríguez1

  • 1Centro Singular de Investigación en Química Biolóxica e Materiais Moleculares (CIQUS) and Departamento de Química Orgánica, Universidade de Santiago de Compostela , 15782 Santiago de Compostela, Spain.

Journal of the American Chemical Society
|October 24, 2017
PubMed
まとめ

研究者たちは DNAとパラジウムを 選択的に結合させるペプチドを設計しました この金属による相互作用は逆転し,ペプチドが細胞に侵入することを可能にします.

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科学分野:

  • 生物化学
  • 分子生物学
  • 化学生物学

背景:

  • GCN4 bZIP転写因子は遺伝子調節に作用する.
  • 特定のDNA相互作用のためのペプチドの設計は,分子生物学における重要な分野である.

研究 の 目的:

  • 選択的なDNA結合能力を持つペプチドを設計する
  • 金属依存性および可逆性DNA相互作用を調査する.
  • 金属誘発細胞内化ペプチドを研究する

主な方法:

  • ヒスティジン残留物 (brHis2) を含む GCN4 基本領域 (br) ペプチドの修正
  • コンセンサス標的DNAサイト (5'-GTCAT-3') を使用してDNA結合親和性と選択性を評価する.
  • ペプチド-DNA相互作用を促進するために,パラジウム (Pd) 複合体 (Pd) Cl2) を利用する.
  • パラジウムケレーターで復元可能な複合分解を調査している.
  • ペプチドの細胞膜転移を,パラジアム反応剤で評価する.

主要な成果:

  • 修正されたペプチド (brHis2) 単独では標的DNA配列に結合しなかった.
  • Pd(en) Cl2を添加すると,brHis2がDNAに高親和性で選択的に結合する.
  • ペプチドとDNAの相互作用は逆転可能で,パラジアム複合体とケラターを使用して複数回切り替えることができます.
  • パラジアム治療はbrHis2ペプチドの効率的な細胞内化を引き起こした.

結論:

  • 設計されたペプチドは,選択的な,主要な溝のDNA結合を達成することができます.
  • 金属依存相互作用は,DNA結合の可逆的な制御のためのメカニズムを提供します.
  • パラジウムは基本的なペプチドの細胞内化を促進します.