グルタチオンS-トランスファーゼのイソ酵素およびサイト固有の機能的特徴付けのための活動ベースのプローブ
Ethan G Stoddard1, Bryan J Killinger1, Reji N Nair1
1Chemical Biology and Exposure Sciences, Biological Sciences Division, Pacific Northwest National Laboratory , 902 Battelle Boulevard, Richland, Washington 99352, United States.
Journal of the American Chemical Society
|October 26, 2017
まとめ
研究者は,哺乳類の組織におけるグルタチオンS-トランスファーゼ (GST) 酵素の活性を特定するために,2つの新しい活動ベースのプローブ (ABP) を開発した. これらの探査機は,GSTアクティブサイト内の異なるサイトをターゲットにして,アイソフォーム特有の分析を可能にします.
科学分野:
- 生物化学
- 酵素学
- 薬理学について
背景:
- グルタチオンS-トランスファーゼ (GST) は,内因性および外因性化合物の解毒に関与する重要な第2相薬代謝酵素である.
- 複雑な生物学的サンプルで GST 活性を測定することは大きな課題でした.
- 薬物の代謝と毒性研究には 個々のGSTの貢献を理解することが不可欠です
研究 の 目的:
- 酵素および活性サイト固有のグルタチオンS-トランスファーゼ (GST) の活性を特徴付けるための新しい活動ベースのプローブ (ABP) を開発する.
- 異種生物の代謝に対する特定のGST同型の貢献を区別する.
- 哺乳類のモデルシステムでGSTを研究するための強力なツールを提供すること.
主な方法:
- 異なる2つのABPの開発:グルタチオン (GSH) ベースの光相関性プローブ (GSTABP-G) が"Gサイト"を標的とし,基板模倣プローブ (GSTABP-H) が"Hサイト"を標的とする.
- GSTABP-Gに光反応性成分を組み込み,GSTのUV誘発コバルントラベリングを行う.
- GSTABP-Hをメカニズムベースの阻害剤として設計し,H部位の活性性を評価する.
- 肝臓組織における競争実験による探査特異性の検証.
主要な成果:
- 哺乳類の組織で活性GSTを特徴づけることができる2つのABPの開発に成功した.
- GSTアクティブサイト内の特定のサイト ("G"と"H") を標的にする探査機の能力を実証する.
- コンペティションアッセイにおける探知器の特異性と有用性の検証
結論:
- 開発されたABPは,酵素と活性サイト特有のGST活動の特徴付けのための強力なツールを提供します.
- これらの探査機は,異種生物の代謝に対する異種生物特有のGSTの貢献を研究することを可能にします.
- 生物学的システムにおける複雑な GST 機能を分析する能力を高めています
