細胞浸透性活動ベースのウビキチンプローブは,ヒトデウビキチナゼの細胞内プロファイリングを可能にします

科学分野:

• 生物化学
• 細胞生物学
• 化学生物学

背景:

• デウビキチナゼ (DUB) は,多数の細胞プロセスに関与する重要な酵素である.
• 既存のユビキチン (Ub) ベースのDUB活動ベースのプローブ (DUB ABPs) は,しばしば細胞浸透性を欠き,研究を細胞溶解物に制限しています.
• 細胞溶解は細胞組織を混乱させ,DUBの活動を変化させ,生理学的に重要な調査を妨げます.

研究 の 目的:

• 細胞に浸透する新しいDUB ABPを開発し,DUB活動の細胞内プロファイリングを行う.
• 無傷で生きている細胞の中で DUB とその機能の研究を可能にします
• 細胞環境における DUB の調査を進め,薬剤発見の努力を支援する.

主な方法:

• 半合成アプローチを使用して,反応性弾頭を持つモジュール式,ユビキチンベースのDUB探査機を作成しました.
• 細胞に浸透するペプチド (CPP),特にサイクルポリアルギニン (cR10) は,DUB ABPsの細胞内伝達を強化するために使用されました.
• 生きている細胞の光顕微鏡により,探査器の配送が確認され,無傷のHeLa細胞におけるDUBのプロファイリングには,免疫捕捉と質量スペクトロメトリが使用された.

主要な成果:

• 細胞に浸透する新しい種類の DUB ABP が成功裏に生成され,検証されました.
• サイクルポリアルギニン (cR10) は,TATと比較して,DUB ABPsの細胞内伝達が強化されたことを示した.
• 健全なHeLa細胞における細胞内DUBプロファイリングは,活性DUBを特定し,探査機はインサイトで阻害物質の活性を評価するために使用されました.

結論:

• 細胞浸透性DUB ABPは,本来の細胞環境でDUBを調査するための強力なツールを提供します.
• この技術は,DUBの機能と細胞経路のより深い理解を促進します.
• 開発された探査機は,ヒトのDUBを標的とした薬の発見を進めるための大きな希望を持っています.