ラック・リプレッサーは,動物細胞のラック・オペレータを含むハイブリッドのSV40早期プロモーターから発現を調節することができる

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• 哺乳類の細胞培養
• 遺伝子規制 遺伝子規制

背景:

• 細菌のラクオペロンは,遺伝子調節のためのよく特徴づけられたシステムを提供します.
• 進化した遺伝子工学では,真核生物系にプロカリオトの調節要素を適応させることが極めて重要です.

研究 の 目的:

• 哺乳類の細胞内のエシェリキア・コライ・ラック・オペレーター・レプレッサー・システムの機能を調査する.
• ラック・リプレッサーが哺乳類の文脈でラック・オペレータによって誘導される遺伝子発現を調節できるかどうかを判断する.

主な方法:

• SV40早期プロモーターの駆動レポーター遺伝子 (大T抗原またはクロラムフェニコルアセチルトランスフェラーゼ) にリンクされたラックオペレータを含むプラズミドの構築.
• 哺乳類の細胞における in vitro 転写アッセイおよび in vivo 遺伝子発現研究.
• ラック・レプレッサーをコードするプラズミドによる共伝染実験とIPTG (イソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシド) による治療.

主要な成果:

• バクテリアのラック抑制剤は,ラックオペレータを含むプロモーターからの転写をin vitroで抑制した.
• 遺伝子発現 (大T抗原合成とCAT活性) は,ラック・レプレッサーが存在すると,体内では抑制された.
• 抑制は用量依存であり,IPTGによって可逆性があり,生理学的機能を示した.
• CAT活動抑制は,CAT mRNAレベルの低下と相関しており,転写制御を示しています.

結論:

• E. coliのラクオペロンの規制要素は,哺乳類の細胞にうまく適応し,生理的に機能することができます.
• これは,真核生物における制御された遺伝子発現のための細菌の遺伝的調節システムを使用する可能性を示している.
• この発見は,哺乳類のシステムにおける誘導可能な遺伝子発現戦略の道を開く.