動物におけるアポトーシスのイメージングのために,GFPのベータ鎖を反転させることで,グリーンフッ素タンパク質レポーターを設計する
Qiang Zhang1,2, Antonino Schepis2, Hai Huang2
1Department of Pharmaceutical Chemistry , University of California-San Francisco , San Francisco , California 94158 , United States.
科学者は動物におけるアポトーシス (プログラムされた細胞死) を追跡するための新しいレポーターであるFlipGFPを開発しました このツールはカスパースの活性化の可視化を促進し,発達生物学とプロテアースの研究を支援します.
科学分野:
- 生物化学
- 分子生物学
- 発達生物学
背景:
- カスパスは動物におけるアポトーシスシグナル伝達を媒介する重要なタンパク質である.
- カスパースの活動を視覚化するための既存の方法は,解像度と範囲が限られている可能性があります.
研究 の 目的:
- プロテアゼ活性のための新しい,敏感で汎用的な素レポーターを開発し,特にカスパスをターゲットにします.
- 空間時間解像度でアポトーシスの視覚化におけるこのレポーターの有用性を実証する.
主な方法:
- GFPベースのフッ素タンパク質レポーターであるFlipGFPを GFPのβ鎖を改変して設計した.
- TEVプロテアゼと処刑カスパスのためのFlipGFPベースのレポーターを開発した.
- 生きたゼブラフィッシュの胚とドロソフィラの中腸でアポトーシスを視覚化するためにカスパースレポーターを適用しました.
主要な成果:
- FlipGFPは,タンパク質分裂時に100倍の光変化を達成する.
- 空間時間解像度の高いゼブラフィッシュ胚のアポトーシスを 視覚化しました
- FlipGFPベースのカスパースレポーターを使用して,ドロソフィラ中腸のアポプトシ細胞を検出しました.
結論:
- FlipGFPは,動物の発達中のアポトーシスを監視するための強力なツールです.
- FlipGFP戦略は,非カスパを含む様々なプロテアゼのリポーターを作成するために適応することができます.
- この設計原理は,赤色光タンパク質レポーターを設計する可能性を秘めている.
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