調節可能なヘテロアロマティック・スルフォンは細胞内システインプロファイリングを強化する
Hashim F Motiwala, Yu-Hsuan Kuo, Brittany L Stinger
1Department of Biological Chemistry , University of Michigan Medical School , 5220E MSRB III 1150 W. Medical Center Drive , Ann Arbor , Michigan 48109 , United States.
Journal of the American Chemical Society
|December 28, 2019
まとめ
新しいヘテロアロマティック・スルフォン・プローバは,細胞内プロテオーム分析のための迅速かつ選択的なシステイン結合を提供します. これらの反応剤は反応速度を大幅に加速し,安定性を改善し,3000以上の反応性チオルの効率的な発見を可能にします.
科学分野:
- 化学生物学
- プロテオミクス
- 有機化学
背景:
- システイン結合は化学生物学とプロテオミクスにとって極めて重要です.
- 既存のシステインアルキル化反応剤は反応速度と安定性に制限があります.
研究 の 目的:
- 新型システイン結合反応剤としてのヘテロアロマティック・スルフォンのライブラリを評価する
- 構造変化が反応性や安定性に与える影響を評価する.
- プロテオーム全体のチオール分析のために,培養細胞でこれらのプローブをプロファイリングする.
主な方法:
- 多種多様な異味スルフォンライブラリの合成と評価.
- システイン結合反応の運動分析
- デシオビオチンで機能した探査機を使って 細胞ベースのプロファイリング
- 質量スペクトロメトリーによるチオールの特定と定量化
主要な成果:
- ヘテロアロマティックサルフォン置換は反応速度を3倍以上増加させた.
- 探査機は,培養細胞でミリモラー以下濃度で迅速なチオルの飽和を達成した.
- 質量スペクトロメトリーは,ネイティブの細胞環境で3000以上の反応性/アクセシブルチオールを特定した.
- 異なる検出器のタイプ間で補完的なシステイン検出が観察されました.
結論:
- ヘテロアロマティックスルフォンは,システイン結合のための調節可能で安定した,高度に反応性のある支架を提供します.
- これらの探査機は,細胞内プロテオームプロファイリングのための従来の反応剤に比べて,重要な利点を提供しています.
- 開発された方法論は,効率的な共性結合体発見と深層のタンパク質分析を可能にします.
