条件付き,双極性抗体トラップでネイティブタンパク質にリンパチロシンを標的とする
Xin X Zhou1, Colton J Bracken1, Kaihua Zhang2
1Department of Pharmaceutical Chemistry, University of California, San Francisco, California 94158, United States.
Journal of the American Chemical Society
|September 14, 2020
まとめ
研究者は,リン酸化チロシン (pY) タンパク質に対する特定の抗体を設計するために,リコンビナントAbペアによるリン酸化チロシン標的化 (pY-TRAP) という新しい方法を開発した. この技術は,Ub-pY59とZAP70-pY248のような挑戦的なタンパク質標的のための高度に選択的な結合物質の作成を可能にします.
科学分野:
- バイオテクノロジー
- 免疫学
- タンパク質工学
背景:
- 折りたたまれたタンパク質におけるフォスフォチロジン (pY) モチーフに対する抗体を設計することは,pYとタンパク質の構造の両方を認識する必要性があるため困難である.
- リン酸化タンパク質は細胞の信号伝達において重要な役割を果たしますが,特定の結合物質はしばしば欠けています.
研究 の 目的:
- ネイティブ・フォスフォチロシンタンパク質に対する配列特異の抗体を設計するための新しい in vitro 方法を開発する.
- PYタンパク質のターゲットに高度に特異な結合物質を製造する.
主な方法:
- リコンビネントAbペアによるフォスフォチロシンターゲティング (pY-TRAP) 方法は,非自然なアミノ酸によるpYタンパク質の生成を伴う.
- 2段階の抗体選択プロセス:最初に,pYモチーフのための結合体 (B1),次に,B1とpYタンパク質の複合体のための第二結合体 (B2).
- Ub-pY59とZAP70-pY248のエンジニアリング・バインダーへのpY-TRAPの適用
主要な成果:
- pY-TRAPは,折りたたまれたUb-pY59とZAP70-pY248の高度に特異な抗体結合体を成功裏に生成した.
- エンジニアリングされた抗体は,野生型タンパク質または他のpYペプチド/タンパク質に検出可能な結合を示さなかった.
- pYモチーフのネイティブの折りたたまれたタンパク質の特異性を証明した.
結論:
- pY-TRAPアプローチは,本来のフォスフォチロシンタンパク質に結合するシーケンス固有の抗体を設計するための一般化可能な戦略を提供します.
- この方法は,複雑なタンパク質構造内のpYモチーフをターゲットにするという課題を克服します.
- Ub-pY59のような特定のフォスフォフォームの研究を可能にします.
