酵母から得られたDNA結合タンパク質の浄化とクローン化により,静音剤とアクティベーターの両方に結合します

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• イースト遺伝学 イースト遺伝学
• トランスクリプションに関する規則

背景:

• DNA結合タンパク質であるRAP1 (以前はSBF-E) は,酵母における規制DNAサイトと相互作用する.
• RAP1は,静かな場所の既知のレギュレータによってコード化されていません.
• RAP1の遺伝子調節における正確な機能は,まだ完全に解明されていない.

研究 の 目的:

• RAP1タンパク質を精製し,その遺伝子を分離するために.
• 転写調節におけるRAP1の役割を調査する.
• RAP1が遺伝子の活性化と抑制の両方で機能できるかどうかを判断する.

主な方法:

• タンパク質の浄化のためのDNA親近性染色学.
• Lambda gt11 ゲノムライブラリ 遺伝子分離のための抗体を用いたスクリーニング.
• 致死率とin vivo機能の評価のための遺伝子破壊.
• DNAターゲットを決定するためのインビトロ結合測定法.
• 調節部位の機能的置換を評価するためのインビボアッセイ.

主要な成果:

• RAP1を精製し,その遺伝子を分離した.
• RAP1遺伝子の破壊は,酵母で致命的です.
• RAP1は,MATαおよびリボソームタンパク質遺伝子の上流活性化部位 (UAS) に結合する.
• UAS-bound RAP1サイトは,静音器結合サイトを in vivo で機能的に置き換えることができます.

結論:

• RAP1は酵母に欠かせない遺伝子である.
• RAP1は,多用途の転写調節剤である.
• RAP1の機能 (活性化または抑制) は,その結合部位によって文脈に依存しています.