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Base Excision Repair01:54

Base Excision Repair

25.2K
One of the common DNA damages is the chemical alteration of single bases by alkylation, oxidation, or deamination. The altered bases cause mispairing and strand breakage during replication. This type of damage causes minimal change to the DNA double helix structure and can be repaired by the base excision repair (BER) pathways. BER corrects damaged DNA sequences by removing the damaged base and restoring the original base sequence using the complementary strand as a template.
The first step of...
25.2K

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SELEX後のアプタマー工学の加速は,エクソヌクレアゼ消化を使用する

Juan Canoura1, Haixiang Yu1, Obtin Alkhamis1

  • 1Department of Chemistry and Biochemistry, Florida International University, 11200 Southwest Eighth Street, Miami, Florida 33199, United States.

Journal of the American Chemical Society
|December 30, 2020
PubMed
まとめ
この要約は機械生成です。

エキゾヌクレアスを用いた新しい方法は,アプタマー結合親和性を迅速に評価し,アプタマー工学を改善します. このテクニックはアデノシンなどの特定の標的に対するアプタマー選択を強化し,敏感なバイオセンサの開発を可能にします.

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科学分野:

  • バイオテクノロジー
  • 分子生物学
  • 分析化学

背景:

  • エクスポネンショナル・エンリッチメントによるリガンドの系統的進化 (SELEX) は,アプタマーを分離するために使用されますが,高い親和性と特異性を持つ最適な配列を特定することは困難です.
  • 既存のセレックス後のアプタマー工学の方法は,バイアス,変動する成功率,専門機器の必要性などの制限があります.

研究 の 目的:

  • アプタマーの結合特性を調べるために,一般化可能な,迅速な,ラベルフリーな測定法を開発する.
  • 結合特性を改善したアプタマーを設計し,特に標的分子の親和性と特異性を向上させる.
  • 小分子とタンパク質結合アプタマーの両方に,開発された方法の適用性を実証する.

主な方法:

  • エキゾヌクレアゼIIIとエキゾヌクレアゼIを用いて,リンガンド結合時の消化運動の変化をモニタリングすることで,アプタマーの結合特性を分析した.
  • 試験はオクラトキシン結合DNAアプタマーとその変異体に適用し,リガンド結合とエクソヌクレアスの消化運動を相関させた.
  • ATP,ADP,AMP,アデノシンに無差別に結合するDNAアプタマーを,突然変異者をスクリーニングし,高親和性アデノシン特異のアプタマーを特定することによって設計した.

主要な成果:

  • リガンド結合は,アプタマー-リガンド親和性と密接に相関する方法で,エクソヌクレアスの消化運動を変化させた.
  • アデノシンと結合する2つのアフィニティアプタマーを 特定した
  • 50%の血清でアデノシンを検出する1μMの検出限界を達成するために,エンジニアリングされたアプタマーベースの電気化学センサーを開発しました.

結論:

  • 開発されたエクソヌクレアースベースの測定法は,アプタマー-リガンド結合親和性を特徴づける一般化可能で効果的な方法である.
  • このアプローチは,バイオセンシングを含む様々な用途に適した結合特性を持つアプタマーの設計を容易にする.
  • この方法は,高通量スクリーニングに適応し,多様な配列,構造,長さのDNAアプタマーに適用できます.