膨張顕微鏡における核酸の普遍的なラベリング戦略

科学分野:

• 分子生物学
• 顕微鏡技術
• 遺伝学

背景:

• 拡張顕微鏡 (ExM) は,細胞内のRNAのナノスケールイメージングを可能にします.
• ExMでのRNAラベリングの現在の方法は複雑である可能性があります.
• 遺伝子発現パターンの空間的解像度を改善する必要がある.

研究 の 目的:

• ExMでの簡素化されたRNAラベリングのための多価反応剤を開発し,検証する.
• RNA FISHのような既存の技術とこれらの反応剤の互換性を評価する.
• ExMでRNAの高解像度ナノスケールイメージングを実現する.

主な方法:

• DNAオリゴヌクレオチド探査装置のための多価レアジェンスの開発
• 反応剤をインシット (in situ) 混合連鎖反応RNA FISHで統合する.
• 多色染色とイメージングのための反応剤の適用
• ×4および ×10 ExMでのラベリング戦略の検証

主要な成果:

• 反応剤はRNA FISHと互換性があり,トランスクリプト保持を保証する.
• 開発された方法を使用して多色染色が成功しました.
• ×10 ExMで ~50 nmの解像度を達成し,拡張前と拡張後のラベリングの両方を使用します.
• ExMに対するDNAオリゴヌクレオチドの急速な機能化が示された.

結論:

• 新しい多価分子は,ExMのためのDNAオリゴヌクレオチド機能化を簡素化します.
• このアプローチはナノスケールでのRNAイメージング能力を高めます
• この方法は多色染色と高解像度の空間トランスクリプトミクスをサポートします.