生物全体における大規模複合モザイクCRISPRの乱れ

科学分野:

• 遺伝学
• 分子生物学
• システム生物学

背景:

• 組織特異的な文脈での遺伝子機能の理解は 複雑な生物学的プロセスを解読するのに不可欠です
• 大規模な遺伝的干渉の既存の方法は,多くの組織における in situ 解析の解像度が欠けている.
• 進化したトランスジェニック・プラットフォームの開発は,包括的なゲノム解読に不可欠です.

研究 の 目的:

• マウスのインシット遺伝子スクリーニングのための誘導可能なモザイク動物 (iMAP) システムを導入する.
• 生物全体に広がる多数の遺伝子を CRISPR で並行的に標的にする能力を示すこと.
• 文脈依存の遺伝子機能を特定するための予備的な Perturb-Atlas を生成する.

主な方法:

• Cre-loxPとCRISPR-Cas9技術を活用したトランスジェニックマウスモデル (iMAP) の開発.
• 個別的にフラックスされたgRNAユニットのタンデム配列をコードするトランスゲンの生殖線伝達.
• 各細胞の単一のgRNAのモザイク発現を誘導するクリーム媒介による再結合.
• フェノタイプの特徴と遺伝子変異のマッピングのためのgRNA表現を使用する.

主要な成果:

• 少なくとも100の遺伝子を同時に 標的としたモザイクマウスを成功させました
• 39種類のマウスの組織に 90の遺伝子の変異をマッピングし ミニチュア Perturb-Atlasを作りました
• 組織特異的干渉分析により,文脈依存の遺伝子機能に関する新しい洞察を特定した.
• 単一遺伝子の乱射線の高通量派生のためのiMAPの有用性を実証した.

結論:

• iMAPプラットフォームは,インシット,全身遺伝学および機能的ゲノミクスのための強力なツールを提供します.
• iMAPは文脈特有の遺伝子役割の発見を容易にし,ゲノム解読の努力を加速します.
• この技術は複雑な生物学的システムにおける 遺伝子機能の理解を深めるのに 重要な可能性を秘めています