テンポラルゲートによるプロテアゼ活動およびタンパク質相互作用を検出するためのモジュール型ペロキシダースベースのレポーター
Guanwei Zhou1,2, Wei Wei Wan1,3, Wenjing Wang1,2,3
1Life Sciences Institute, University of Michigan, Ann Arbor, Michigan 48109, United States.
Journal of the American Chemical Society
|December 13, 2022
まとめ
研究者は生物学的過程を研究するための モジュール式酵素レポーターシステムである CLAPon を開発しました この汎用性のあるプラットフォームは,プロテアゼの活性とタンパク質の相互作用を感知し,信号の増幅を可能にします.
科学分野:
- 生物化学
- 分子生物学
- 細胞生物学
背景:
- 酵素レポーターは,信号増幅を通じて生物学的プロセスを研究するために高い感度を提供します.
- 多様な酵素レポーターを作るためのモジュラーモチーフは必要である.
- 強化されたアスコルベット過酸化酵素 (APEX) は,レポーター発達の鍵となる酵素である.
研究 の 目的:
- 多用途の酵素リポーター設計のためのモジュール化ペロキシダースベースのモチーフを開発する.
- CLAPonモチーフのプロテアゼ活性とタンパク質相互作用 (PPI) の検出における有用性を実証する.
- タイムとケミカルゲーティングのような 先進的な機能で 記者を設計する
主な方法:
- CLAPon (酸塩コイルケージAPEX) のモジュラーモチーフの開発
- プロテアゼ活性検出のためのCLAPonベースのリポーターの設計と試験.
- タンパク質とタンパク質の相互作用を検出するためのPPI-CLAPon変種 (1.0および1.1) の設計.
- 光ゲート (LiPPI-CLAPon) と化学ゲートレポーターの開発
主要な成果:
- プロテアゼの活性に対するCLAPonは,分裂時にシグナルを390倍に増加させた.
- PPI- CLAPon1. 0は,サブセルラー解像度の高いPPIで最大107の信号対ノイズ比 (SNR) を示した.
- LiPPI- CLAPon1. 0はカルシウム依存性PPIを検出し,SNRは17でした.
- 化学的にゲートされたPPI-CLAPon1.0は,追加の汎用性を提供しました.
結論:
- CLAPonモチーフは,遺伝的にコードされたレポーターを設計するためのモジュラーで汎用的なプラットフォームを提供します.
- CLAPonベースのレポーターは,様々なシグナル伝達プロセスにおけるプロテアゼ活動とPPIを研究するのに有効です.
- エンジニアリング・リポーターは 先進的な生物学的研究のために タイムとケミカル・ゲーティングを提供しています
