ヒトT細胞の機能を調整するための塩基編集型変異遺伝マップ

科学分野:

• 免疫学
• 分子生物学
• 遺伝子工学

背景:

• CRISPRスクリーニングは,免疫療法の標的であるT細胞機能を制御する遺伝子を特定します.
• 重要な遺伝子内の特定の核酸配列を調査するには新しい方法が必要です.
• 人間のT細胞における系統的変異は,特定のフェノタイプを調節するアレルを明らかにすることができます.

研究 の 目的:

• T細胞の活性化を調節する核酸を特定するための大規模な塩基編集変異性プラットフォームを開発する.
• T細胞の活性化とサイトカインの生成を制御する特定のアミノ酸の残留を特定する.

主な方法:

• 385のT細胞関連遺伝子のタンパク質コーディングサイトをターゲットとする塩基エディターのための ~117,000の単一ガイドRNA分子ライブラリを生成した.
• 主要なヒトT細胞で 系統的な塩基編集変異を起こした.
• 高解像度スクリーニングのために,プロトスペーサー付近モチーフ要件を緩和したベースエディタを使用した.

主要な成果:

• 重要なタンパク質の残基 (例えば,PIK3CD,VAV1,LCP2,PLCG1,DGKZ) の変異を持つ多数のアレルが識別され,機能獲得および機能喪失の変異が含まれています.
• 塩基編集がT細胞の 細胞毒性機能を正または負の方向に変化させることを示した.
• 高解像度スクリーニングにより,T細胞機能を調節する特定の構造領域とタンパク質相互作用部位を明らかにした.

結論:

• 主要免疫細胞の塩基編集スクリーンは,T細胞の調節に関する生化学的な洞察を提供します.
• このプラットフォームは 新種の免疫療法の設計と開発を加速させる可能性を秘めています
• 治療目的でT細胞の機能を微調整する特定のヌクレオチドと残留物を特定した.